改进型免疫侧向层析黄曲霉毒素B1检测方法研究

来源 :合肥工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:narco008
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黄曲霉毒素B1是常出现在霉变的农产品中的一种由黄曲霉菌代谢产生的毒素,它毒性极强,是砒霜毒性的68倍。若食用超过一定剂量的黄曲霉毒素B1则会导致急性疾病,例如腹泻、肝脏受损等,严重情况下甚至会导致死亡。因此,一种新型农产品中黄曲霉毒素B1快速检测方法的建立对于保障世界食品卫生安全有着重大的意义。本论文围绕以下三个方面展开了讨论:(1)经典型免疫层析黄曲霉毒素B1检测技术建立基于抗原和抗体之间的特异性免疫识别是经典的免疫层析方法的基本原理,其主要试验方案也是根据这一实验原理制定的。首先利用胶体金作为可见光下标记物,用于显色,在胶体金表面通过静电吸附标记上黄曲霉毒素B1抗体,通过肉眼观察C/T线的显色情况来判断胶体金标记的抗体是否有和T线上的包被原或C线上羊抗鼠二抗结合,从而分析样品中黄曲霉毒素B1的含量,并进行定量分析。实验中具体优化了用于标记的胶体金中的重要参数,在得到的最佳实验条件下,可以实现5分钟内完成检测,且灵敏度达到0.5μg/L,在0.1~5μg/L范围内表现出良好线性(R~2=0.9872),本技术重复性强、稳定性高,且具有非常高的特异性,可以有效的检测农产品中的黄曲霉毒素B1。(2)改进型免疫层析黄曲霉毒素B1检测技术建立本研究在传统免疫侧向层析试纸条基础上引入预孵育方法,将抗体与胶体金偶联物直接与待测样品预孵育取代传统标记垫,在可行性研究的基础上优化冷冻干燥的保存条件、以及冷冻干燥工艺,得出最佳实验方案,并检测黄曲霉毒素预孵育试纸条的特异性和灵敏度。改进型免疫层析技术采用了预孵育的方法,实现了5分钟内黄曲霉毒素B1的超灵敏检测,其肉眼检测灵敏度为0.05μg/L,相比于传统型方法灵敏度提高了十倍,且同样表现出极强的线性,线性范围为:0.01~0.5μg/L(R~2=0.9861),可用于在复杂样品中超灵敏检测。(3)茶叶中黄曲霉毒素B1超灵敏免疫侧向层析技术建立茶叶中存在多种基质,对实现茶叶中黄曲霉毒素B1的快速检测产生了严重的影响。本研究首先探讨了茶叶中茶多酚等物质的影响,然后通过稀释效应降低了基质的影响,这就要求更为严格的灵敏度,进而应用了改进型免疫侧向层析方法检测,实现了复杂样品中准确检测。且表现出了与标准样品基本一致的极强线性:0.01~0.5μg/L(R~2=0.9741)。
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