【摘 要】
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目的 研究人肺癌组织热休克蛋白gP96椂嚯母春衔锏谋泶锼剑环伟┫赴昀丛吹闹至鲎橹痝P96椂嚯母春衔锏奶崛『图ǎ煌庵苎丛词魍蛔聪赴―C)培养和鉴定;将gP96椂嚯母春衔锖虳C体外共同孵育制备疫苗,在体外激活T淋巴细胞的能力及在小鼠体内的抑制肿瘤生长作用的研究.方法 ①采用半定量RT-PCR法检测肺癌患者的肿瘤组织与癌旁正常组织gp96在RNA水平表达差异;免疫组化法检测蛋白表达水平差异.②采用亲和层析和离子交换层析法分别自小鼠来源的肺腺癌细胞株LA795及人来源的肺腺癌Paa细胞株的肿瘤组织中提取热休克蛋白gP96-多肽复合物,利用银染、WesternBlot法进行鉴定并利用紫外分光光度法测定其浓度.③自国产615小鼠及健康成人外周血中提取单个核细胞在GM-CSF、IL-4、TNF-α等细胞因子作用下体外培养成DC并经流式细胞仪鉴定.④将提取的gP96与体外培养的DC体外共同孵育制成疫苗,在体外激活T淋巴细胞,测量IFN-γ作为特异性CTL反应的指标.⑤以此疫苗分别免疫国产615小鼠及免疫重建严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)后分别皮下种植LA795及Paa细胞株来源肿瘤组织块,观察两种小鼠成瘤率,肿瘤生长情况,平均生存时间.
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