【摘 要】
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以纤细裸藻(Euglena gracilis)为实验对象,对纤细裸藻可培养藻际细菌进行分离及鉴定。后将分离出的细菌分别与纤细裸藻进行共培养,通过对纤细裸藻生长指标(细胞密度与叶绿素a含量)的测定,筛选出对纤细裸藻的生长具有促进效果的菌株,并确定优势菌株的最佳初始接种浓度,进一步通过对纤细裸藻共培养体系与藻纯培养体系代谢物的研究,对优势菌与纤细裸藻共培养促进纤细裸藻生长的机制进行初步的探索。1.采用
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以纤细裸藻(Euglena gracilis)为实验对象,对纤细裸藻可培养藻际细菌进行分离及鉴定。后将分离出的细菌分别与纤细裸藻进行共培养,通过对纤细裸藻生长指标(细胞密度与叶绿素a含量)的测定,筛选出对纤细裸藻的生长具有促进效果的菌株,并确定优势菌株的最佳初始接种浓度,进一步通过对纤细裸藻共培养体系与藻纯培养体系代谢物的研究,对优势菌与纤细裸藻共培养促进纤细裸藻生长的机制进行初步的探索。1.采用稀释涂布平板的方法,对纤细裸藻的藻际细菌进行分离,然后用平板划线的方法进行纯化,通过测定藻际细菌的生理生化、形态学指标及16S rDNA进行鉴定,最后鉴定出5株不同的纤细裸藻的可培养藻际细菌,分别为属于β-变形菌纲的E1-Paraburkholderia fungorum(MG576012),属于α-变形菌纲的E3-Methylobacterium radiotolerans(NR036824)及E5-Sphingomonas dokdonensis(NR043612),与E1属于同一纲分类的E6-Ralstonia insidiosa(AF488779)和属于放线菌门的ET2-Leifsonia soli(MH497612)。2.将分离的五株菌与纤细裸藻进行共培养,通过对纤细裸藻生长指标的测定评价五株菌对纤细裸藻生长的影响。研究结果表明,E1(Paraburkholderia fungorum)、E3(Methylobacterium radiotolerans)和E5(Sphingomonas dokdonensis)三株菌对纤细裸藻的生长均有显著性的促进效果,E5对纤细裸藻生长的促进效果最为显著,E6(Ralstonia insidiosa)与ET2(Leifsonia soli)两株菌对纤细裸藻没有明显的作用效果。最佳优势菌株E5五种不初始接种浓度的优化实验结果表明,104、105、106、107、108 cfu/mL五种浓度均对纤细裸藻生长的具有一定的促进效果,其中在105-107 cfu/mL浓度范围内,E5细菌对纤细裸藻生长的促进效果随浓度的增加而增加,最佳促进浓度为107cfu/mL。3.对E5(Sphingomonas dokdonensis)菌株与纤细裸藻共培养的体系,和纤细裸藻纯培养体系两种藻类培养方式下产生的代谢物进行了检测与分析,探究利用E5菌藻共培养方式对纤细裸藻的生长有促进效果的原因和机制。两种培养模式下产生的差异代谢物的检测主要分为两个离子检测模式,即正离子检测模式和负离子检测模式。最终离子检测的结果为两种培养模式之间共有82个具有差异的代谢物,大部分是氨基酸、脂肪酸、核苷酸等初级代谢物。其中,正离子模式下共检测得到的差异代谢物有51种。藻菌共培养体系的处理组与微藻纯培养体系的处理组相比,精氨酸、天冬酰胺、腺嘌呤等代谢物显著上调;谷氨酸、组氨酸、丙氨酸等氨基酸类、胆碱类等代谢物显著下调。负离子模式下共检测得到差异代谢物46种。其中天冬酰胺、天冬氨酸、脂肪酸如肉豆蔻酸等代谢物显著上调;谷氨酸、丙氨酸、色氨酸、酪氨酸等氨基酸,磷酸,琥珀酸等物质显著下调。
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