含脱卤酶菌种的筛选

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lanangel1234
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脱卤酶是能催化卤族离子从卤代有机化合物上释放出来的酶。通过对邻位卤代醇的催化作用,可以使邻位卤代醇脱去卤族离子形成相应的环氧化合物。由于环氧化合物在医药等领域得到了广泛应用,脱卤酶近来受到了人们的广泛关注。   本实验以氯乙酸作为唯一的碳源,从全国各地采集的土壤样本中筛选得到73株菌株。利用硝酸银沉淀反应定性检测,得到具有不同转化能力的菌株共52株,利用HPLC和手性HPLC检测菌株的转化率和对映体选择性,并进行了进一步的筛选,最终选择菌株17号进行之后的研究。   对菌株17发酵培养基的碳源、氮源、诱导物、无机金属离子、初始pH值、培养温度、培养时间等进行了研究。结果表明,最适培养基成分为每升含乳糖8g,胰蛋白6g,氯乙酸4g,Na2HPO43.2g,KH2PO41.5g,MgSO498mg,CaCl210mg,FeSO41mg,ZnSO40.1mg,pH6.5,30℃培养35h,17号菌株酶活力达到最高值132.80U/mg。   对菌株17转化β-溴对硝基苯乙醇的底物浓度、介质、温度、时间等转化条件进行研究。结果表明,底物浓度为1g/L,温度为35℃转化底物12h,底物转化率最高可达到90.6%。现有的菌株可以将β-溴对硝基苯乙醇转化为相应的环氧化合物,但是对映体选择性较低,可以尝试提取酶进行高选择性的反应。
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