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金针菇不仅味美适口,而且营养丰富,含有多种功能活性成分。多糖作为金针菇的主要活性成分,具有良好的抗肿瘤、抗炎、免疫调节、抗氧化等活性。目前关于金针菇多糖质量评价,鉴别和控制的报道较少,本研究通过对不同品种的金针菇多糖进行提取纯化、结构解析、活性论证,从而建立金针菇多糖的多维指纹图谱,揭示其谱效关系。本文主要研究结果如下:
1.通过D-最优混料设计,得出最优复合酶配比为纤维素酶15.5%,果胶酶52.3%,木瓜蛋白酶32.2%;利用响应曲面Box-Behnken试验设计,对酶法提取金针菇多糖影响其得率的三个因素即液料比、酶解时间、酶解温度进行优化,得出金针菇多糖提取的最佳工艺条件为液料比21mL/g,酶解时间111min,酶解温度57℃。在此条件下,金针菇多糖的提取率最高为10.09±0.241%。
2.测定20种不同品种金针菇多糖的总糖含量,糖醛酸含量和蛋白质含量,采用多重光谱和色谱技术,建立了金针菇多糖的多维指纹图谱。结果显示,不同品种的金针菇的多糖组分存在差异。通过高效体积排阻色谱法测定金针菇多糖的分子量分布,发现其主要集中在10-50kDa和100-500kDa之间。扫描电镜检测结果发现真实来源的金针菇多糖表观形态结构高度相似,成片状结构,表面光滑。XRD指纹图谱的建立确定了金针菇多糖的非晶体结构,紫外光谱指纹图谱的建立考察了金针菇多糖的纯度。红外指纹图谱确定了12个特征共同峰,结合主成分分析能够准确区分真实来源的金针菇多糖。HPLC指纹图谱确定8个特征共同峰,分别为甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖,可以进一步通过主成分分析鉴别白色和黄色金针菇多糖。金针菇多糖多维指纹图谱的建立可以准确鉴定未知来源金针菇多糖的质量,判别掺假金针菇多糖,可作为金针菇多糖真伪鉴别和质量控制的重要依据。
3.利用MTT法测定金针菇多糖对肿瘤细胞被抑制的增殖率和对巨噬细胞RAW264.7的增殖率,通过多元线性分析,建立金针菇多糖HPLC指纹图谱8个特征共同峰相对峰面积和体外活性的相关性。20种不同品种金针菇多糖体外活性差异显著,甘露糖(+)、鼠李糖(-)、半乳糖(-)、木糖(-)对HepG2细胞抑制作用有显著影响(P<0.05),甘露糖(+)、氨基葡萄糖(-)、木糖(-)对SGC7901细胞抑制作用有显著影响(P<0.05),甘露糖和木糖的含量是控制金针菇多糖体外抗肿瘤活性的重要单糖组成成分,岩藻糖的含量对RAW264.7细胞的增殖作用有显著负相关作用(P<0.05)。
1.通过D-最优混料设计,得出最优复合酶配比为纤维素酶15.5%,果胶酶52.3%,木瓜蛋白酶32.2%;利用响应曲面Box-Behnken试验设计,对酶法提取金针菇多糖影响其得率的三个因素即液料比、酶解时间、酶解温度进行优化,得出金针菇多糖提取的最佳工艺条件为液料比21mL/g,酶解时间111min,酶解温度57℃。在此条件下,金针菇多糖的提取率最高为10.09±0.241%。
2.测定20种不同品种金针菇多糖的总糖含量,糖醛酸含量和蛋白质含量,采用多重光谱和色谱技术,建立了金针菇多糖的多维指纹图谱。结果显示,不同品种的金针菇的多糖组分存在差异。通过高效体积排阻色谱法测定金针菇多糖的分子量分布,发现其主要集中在10-50kDa和100-500kDa之间。扫描电镜检测结果发现真实来源的金针菇多糖表观形态结构高度相似,成片状结构,表面光滑。XRD指纹图谱的建立确定了金针菇多糖的非晶体结构,紫外光谱指纹图谱的建立考察了金针菇多糖的纯度。红外指纹图谱确定了12个特征共同峰,结合主成分分析能够准确区分真实来源的金针菇多糖。HPLC指纹图谱确定8个特征共同峰,分别为甘露糖、氨基葡萄糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖,可以进一步通过主成分分析鉴别白色和黄色金针菇多糖。金针菇多糖多维指纹图谱的建立可以准确鉴定未知来源金针菇多糖的质量,判别掺假金针菇多糖,可作为金针菇多糖真伪鉴别和质量控制的重要依据。
3.利用MTT法测定金针菇多糖对肿瘤细胞被抑制的增殖率和对巨噬细胞RAW264.7的增殖率,通过多元线性分析,建立金针菇多糖HPLC指纹图谱8个特征共同峰相对峰面积和体外活性的相关性。20种不同品种金针菇多糖体外活性差异显著,甘露糖(+)、鼠李糖(-)、半乳糖(-)、木糖(-)对HepG2细胞抑制作用有显著影响(P<0.05),甘露糖(+)、氨基葡萄糖(-)、木糖(-)对SGC7901细胞抑制作用有显著影响(P<0.05),甘露糖和木糖的含量是控制金针菇多糖体外抗肿瘤活性的重要单糖组成成分,岩藻糖的含量对RAW264.7细胞的增殖作用有显著负相关作用(P<0.05)。