论文部分内容阅读
[目的]β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)代谢状态在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)发生发展中发挥起着重要作用。APP的增多是β淀粉样蛋白(Amyloid β-protein)增多进而产生沉淀的必然阶段。在AD病人和过表达APP的转基因鼠中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)的磷酸化下调,而上调CREB的磷酸化水平是否能逆转APP的表达,影响γ分泌酶中早老素-1(Preselin 1,PS1)和早老素增强子2(Preselinenhencer2,PEN2)尚不清楚。本研究主要目的是通过在人神经元样细胞SH-SY5Y中过表达APP和G蛋白α亚单位q(Gaq),并激活和抑制CREB,检测PS1、PEN2等AD相关蛋白的变化,分析通过调控CREB防治AD的可行性。[方法](1)培养入神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞,分别为:过表达Gαq(Gαq-SY5Y)细胞、空载体 SY5Y 细胞(Vector-SY5Y)、过表达 APP(APP-SY5Y)细胞。利用Western Blot实验检测APP及γ分泌酶复合体的蛋白成分变化。(2)根据所购买试剂的推荐浓度Forskolin环磷酸腺苷(cAMP)激动剂35谬μmol,H89 2 HCL蛋白激酶A(PKA)受体抑制剂30μmol,分别作用于上述三种不同细胞,37℃培养箱中处理一个小时。每组细胞分为三种处理,激活CREB组、抑制CREB组及对照组。利用Western Blot实验检测APP及Y分泌酶复合体的蛋白成分的变化。(3)观察CREB激动剂、抑制剂处理后细胞的形态变化。[结果](1)Western Blot结果显示:Gαq-SY5Y细胞中磷酸化的CREB水平较Vectior-SY5Y细胞及APP-SY5Y细胞明显增高,APP-SY5Y细胞中的磷酸化CREB水平明显低于Vectior-SY5Y细胞。(2)γ分泌酶复合体的组成成分中早老素增强子(PEN2)及早老素C端(PS1-CTF)表达量亦在Gαq-SY5Y细胞中明显升高。(3)Western Blot结果显示:在激活CREB组PEN2及PS1-CTF的表达量较对照组及抑制CREB组均增高,抑制CREB组两种蛋白低于对照组,但是APP表达量升高。(4)激活CREB可加快Gαq-SY5Y细胞、APP-SY5Y细胞的生长速度,改善细胞的老化状态;抑制CREB则减缓Gαq-SY5Y细胞、APP-SY5Y细胞的生长速度,加重细胞老化状态。[结论](1)激活CREB的磷酸化可上调γ分泌酶复合体中PEN2与PS1-CTF的表达,降低APP水平,加快细胞增殖,缓解细胞老化,可设计基于CREB的AD防治策略。(2)过表达Gαq可上调CREB的磷酸化水平,调控的分子机制值得深入研究。