【摘 要】
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目的:从翻译水平检测MTH1在肝癌细胞株中的表达情况,并观察siRNA干扰MTH1的表达后对人肝癌细胞凋亡和迁移的影响。方法:1、采用蛋白印迹（Western Blot）技术从四株肝癌细胞株（HepG2、SMMC7721、MHCC97H、Huh7）中筛选MTH1表达最高的细胞,后续备用之。2、根据基因库中MTH1序列,设计并合成3对siRNA,采用阳离子脂质体法瞬间转染,采用离体培养肝癌细胞,并设
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目的:从翻译水平检测MTH1在肝癌细胞株中的表达情况,并观察siRNA干扰MTH1的表达后对人肝癌细胞凋亡和迁移的影响。方法:1、采用蛋白印迹（Western Blot）技术从四株肝癌细胞株（HepG2、SMMC7721、MHCC97H、Huh7）中筛选MTH1表达最高的细胞,后续备用之。2、根据基因库中MTH1序列,设计并合成3对siRNA,采用阳离子脂质体法瞬间转染,采用离体培养肝癌细胞,并设空白对照组、阴性对照组及MTH1-siRNA1、MTH1-siRNA2、MTH1-siRNA3转染组。3、采用蛋白印迹（Western Blot）法检测各组细胞中MTH1蛋白水平表达的变化,并筛选沉默效果最佳序列。4、运用流式细胞技术检测转染后细胞凋亡的影响,划痕实验检测转染后细胞迁移能力的变化。结果:1、Western blot技术检测显示,MTH1蛋白在HepG2、SMMC7721、MHCC97H、Huh7四种肝癌细胞株中均有表达,并且在HepG2、SMMC7721中表达量最高。2、采用Western blot技术检测正常组、阴性对照组及干扰组中MTH1的表达量显示:MTH1-siRNA2、MTH1-siRNA3转染组中MTH1蛋白表达明显低于正常对照组和阴性对照组,差异具有统计学意义（P<0.01）,且MTH1-siRNA3转染组干扰效果最好。3、流式细胞仪检测结果显示MTH1-siRNA3转染组细胞凋亡率高于空白组及阴性对照组,差异具有统计学意义（P<0.01）;划痕实验结果显示,MTH1-siRNA3转染组细胞的划痕愈合率低于空白对照组和阴性对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.HepG2、SMMC7721、MHCC97H、Huh7细胞中,HepG2、SMMC7721为MTH1基因高表达细胞株。2.siRNA抑制MTH1表达可促进肝癌HepG2细胞的凋亡,并可降低肝癌HepG2细胞的迁移能力。
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