紫杉醇诱导MKN-45胃癌细胞凋亡及对cyclinE/cyclinD<,1>表达的影响

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该研究共分三部分.在第一部分中,我们采用MTT法检测不同浓度的紫杉醇(0.001、0.01、0.1、1.0 μ mol/L)体外作用MKN-45胃癌细胞不同时间(24、48、72、96小时)的生长抑制率;再以0.1μmol/L紫杉醇作用12h、24h,用Annexin-V-FITC标记,流式细胞仪检测细胞凋亡率.并用光镜观察0.1μmol/L紫杉醇作用48 h细胞形态.结果发现:光镜下,加入0.1μmol/L泰素24 h后,少数细胞体积变小变形,胞膜仍完整,染色质浓缩并聚集于核膜下;48 h部分细胞失去附壁能力,脱落至培养液中.以上形态改变表明,MKN-45在紫杉醇诱导下出现了细胞凋亡.另有部分肿胀细胞,胞膜已破碎,细胞器崩溃,染色质疏松为坏死细胞.不同浓度的紫杉醇作用24,48,72,96小时后,对肿瘤细胞抑制作用结果表明:(1)随着紫杉醇剂量的增加,细胞的抑制率升高,具有明显的剂量依赖性.(2)同一剂量药物对肿瘤细胞的抑制率具有时间依赖性.流式细胞仪检测显示:0.1 μmol/L紫杉醇作用12h凋亡率为13.44%、作用24h凋亡率为15.89%,两组间无统计学差异,但与对照组0.67%有显著意义(P<0.05);0.01μ mol/L紫杉醇作用24h凋亡率为15.84%与0.1μmol/L组作用24h间无显著差异.因此,我们得出结论:紫杉醇对MKN-45胃癌细胞生长有明显的抑制作用;泰素可诱导胃癌细胞凋亡,但在一定范围内与药物剂量及作用时间无明显相关性.第二部分,我们用0.1μmol/L泰素作用MKN-45胃癌细胞12h、24h,应用流式细胞仪对细胞周期进行检测结果发现:紫杉醇使细胞滞留于G<,2>/M期,随着对细胞作用时间的延长,G<,2>/M期细胞占细胞总体比率逐渐上升.作用MKN-45胃癌细胞12小时G<,2>/M期细胞比例为30.15%;作用24小时G<,2>/M期细胞比例为49.14%,24小时组与对照组(25.96%)有显著差异(P<0.05).第三部分,用0.1μmol/L紫杉醇作用MKN-45胃癌细胞24h,应用流式细胞仪对泰素作用前后CyclinE及CyclinD<,1>的表达进行检测.我们发现,CyclinE的荧光强度由389.36下降为365.24,表达有所下调,而CyclinD<,1>无明显变化.这些结果说明紫杉醇抑癌机制除促进微管双聚体装配成微管,防止微管解聚外,还有细胞凋亡、周期阻滞及CyclinE下调.为紫杉醇在胃癌治疗中的应用提供理论基础.
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