论文部分内容阅读
目的:前列腺癌是常见的泌尿系恶性肿瘤,在欧美发达国家发病率居第1位,死亡率居第2位;在我国,虽发病率低于西方等国家,但近年来随着生活水平及环境变化,发病率逐渐升高。前列腺癌目前的治疗主要为多模式综合治疗,其中包括手术切除、放疗、内分泌治疗等,但是于雄激素抵抗,手术及放疗对于晚期前列腺癌患者疗效不显著。前列腺癌极易复发、侵袭和转移,因此积极寻求前列腺癌相关肿瘤标志物成为前列腺癌早期检测、靶向治疗和预防复发的关键。精子相关抗原9(SPAG9),是癌睾丸抗原(CTA)家族成员之一,在睾丸组织中特异性表达。最近研究表明,在肿瘤的增殖、侵袭、转移等生物学行为中,SPAG9参与并起着重要的调节作用。SPAG9主要是作为支架蛋白,能够辅助活化JNK信号通路,从而促进肿瘤的增殖、侵袭及转移,抑制肿瘤凋亡等。JNK信号通路的活化对于肿瘤的促进均有报道。由此推测,在肿瘤中,SPAG9表达上调,可改变原有的基因调节模式,促进肿瘤的增殖、侵袭及转移等。本研究主要探讨SPAG9对前列腺癌增殖、侵袭、转移等生物学行为的影响。方法1、采用免疫组织化学方法检测人前列腺癌临床标本SPAG9表达水平,并分析其与前列腺癌患者年龄、GS评分、肿瘤分期、淋巴结转移、远处转移、血PSA值等病理学参数的相关性。2、采用Western blot技术检测前列腺癌细胞中SPAG9表达水平,选择高表达细胞系进行干扰,低表达细胞系进行过表达;3、构建SPAG9过表达质粒及干扰质粒,PC3过表达及DU145干扰后,采用q RT-PCR和Western blot验证转染后细胞SPAG9的表达变化;4、CCK-8检测SPAG9对前列腺癌细胞增殖的影响;5、流式细胞术以及Western blot技术检测SPAG9对前列腺癌细胞周期的影响;6、Transwell实验检测转染SPAG9对前列腺癌细胞体外迁移能力的影响;采用划痕实验观察SPAG9对前列腺癌细胞体外迁移能力的影响;7、采用裸鼠成瘤实验体内验证SPAG9对前列腺癌细胞增殖的影响;8、采用Western blot技术检测SPAG9对MAPK信号通路中ERK、JNK以及P38蛋白的变化。结果1、免疫组化实验结果表明,在人前列腺癌标本中,癌组织SPAG9高表达,相对于癌旁组织低表达;统计学分析发现,SPAG9的表达水平与临床GS评分、前列腺癌分期显著相关(P<0.05);2、蛋白水平证实,PC3细胞中SPAG9表达最低,相反,在DU145细胞中表达最高;3、在PC3细胞中,真核表达SPAG9后,其RNA和蛋白均上调,证实真核质粒构建成功;相反,在DU145细胞中干扰SPAG9后,其RNA、蛋白均下调,说明干扰质粒筛选成功;4、CCK-8法实验说明,SPAG9促进前列腺癌细胞的增殖;5、过表达SPAG9后,加快PC3的细胞周期,相反,干扰SPAG9后,DU145细胞周期明显被阻滞;蛋白水平证实,其周期蛋白CDK2及Cyclin D表达增加。6、Transwell迁移实验说明,PC3细胞过表达SPAG9后,穿膜能力明显高于对照组;DU145细胞干扰SPAG9后,穿膜能力低于对照组;划痕实验同样说明,PC3细胞过表达SPAG9后,细胞迁移能力高于对照组;7、裸鼠体内成瘤实验说明,干扰SPAG9后,肿瘤的增殖能力低于对照组;8、在PC3细胞中,过表达SPAG9后,磷酸化JNK、ERK及P38蛋白表达均上调,相反,DU145干扰SPAG9后,磷酸化JNK、ERK及P38蛋白表达均下调。说明,SPAG9活化了JNK、ERK及P38信号通路。结论1、SPAG9在前列腺癌组织中高表达,可能作为早期诊断及预后的指标;2、SPAG9促进前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及侵袭转移等生物学行为;3、SPAG9可能通过ERK、JNK及P38信号通路发挥作用。