自交不亲和性（self-incompatibility）是植物防止近亲繁殖和保持物种连续性的一种重要机制,在植物界普遍存在。苹果（Malus domestica Borkh.）属于配子体自交不亲和类型,是由一个基因座上的复等位基因—S基因控制的,生产中必须配置具有不同S基因型的苹果品种作授粉树或用具有不同S基因型的苹果品种花粉进行人工辅助授粉,才能获得预期的产量和果实品质。如果不了解品种的S基因型,在选配授粉品种时会具有较大的盲目性。快速、早期鉴定苹果品种的S基因型是保证其丰产稳产的一项重要基础工作。河北省近十年来新引进了美国8号、昂林、松本锦、华冠、南方脆和斗南等苹果品种,关于它们的自交不亲和基因型国内外未见报道。为给以上苹果品种确定栽培措施提供可靠的理论依据,作者于2004、2005连续两年对以上几个苹果品种的S基因进行了研究,主要研究结果如下: 1.在基因组DNA提取方法上进行了改进,即:（1）在细胞核裂解之前加入提取液（0.4mol/L葡萄糖,3%可容性PVP,1%β-巯基乙醇）,防止酚类氧化成醌类和DNA降解。（2）用冰冻无水乙醇代替常规用的异丙醇沉淀DNA,防止盐类、糖类等与DNA共沉淀。（3）抽提过程只用氯仿/异戊醇,加速有机相与无机相的分层,减少酚类的污染。（4）DNA的收集采用低速离心法,避免了用钩子挑出对DNA造成的机械损伤。（5）用双蒸H₂O溶解DNA,利于以后测序工作的进行。建立了改进CTAB法,该方法提取基因组DNA的A₂₆₀/A₂₈₀值在1.8～1.9之间,基因组DNA浓度均在2.54μg/μL左右,常规CTAB法提取的基因组DNA的A₂₆₀/A₂₈₀不稳定在1.3～1.7之间,且基因组DNA浓度平均值较改进的方法低0.49μg/μL。用改进CTAB法提取的基因组DNA在0.8%的琼脂糖凝胶电泳条件下检测,DNA呈一条整齐的亮带,无降解,点样孔无残留、发亮现象。 2.在不同试材方面,以新梢顶端刚展开的嫩叶和成熟叶片为试验材料,用改进CTAB法提取基因组DNA,经纯化后样品的A₂₆₀/A₂₈₀值均在1.8～1.9之间,DNA纯度高,RNA和蛋白质去除干净,但成熟叶片提取的基因组DNA浓度较新梢顶端刚展开的嫩叶提取的基因组DNA浓度低0.30μg/μL。因此,基因组DNA提取以新梢顶端刚展开的嫩叶为好。 3.所用试材方面,刚采集的新鲜样品、采集后直接放于—70℃冰箱中的样品和采集后直接放于—40℃冰箱中一个月的样品提取的基因组DNA均较好。直接放于—30℃冰箱中一个月的样品,所提取的DNA出现降解,且有不同程度的变褐。 4.在引物方面,根据苹果S-RNase的保守序列“FTQQYQ”和“anti-1/MIWPNV”设计了引物P₁∶5′-TTTACGCAGCAATATCAG-3′;P₂∶5′-ACGTTCGGCCAAATA/CATT-3′,用此引物对已经确定的苹果基因组DNA中的S基因进行PCR扩增,结果能扩增出所选品种的S_1-S_2-、S_3-、S_5-、S_7-、S_9-、S_g、S_24-、S_26-、S₂₇、和S_30-等全部S-等位基因,具有较高的S-等位基因特异性。 5.南方脆、华冠、昂林、松本锦和美国8号等5个苹果品种的基因组DNA的S基