【摘 要】
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土地盐渍化是限制农作物生长、发育和产量的非生物胁迫之一。针对目前全球土壤盐碱化日益严重,本实验对红树植物-角果木盐胁迫(500mmol·L-1)后不同时间点的根系进行了生物信
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土地盐渍化是限制农作物生长、发育和产量的非生物胁迫之一。针对目前全球土壤盐碱化日益严重,本实验对红树植物-角果木盐胁迫(500mmol·L-1)后不同时间点的根系进行了生物信息学和分子生物学的研究,选定了进行差异基因筛选的各时间点,并采用最新的高通量测序技术RNA-seq对处理不同时间点的根系样品进行转录组和数字表达谱测序;根据表达谱分析结果,候选了40个基因进行半定量和real-time验证,根据测序和表达验证结果,候选了其中8个基因进行了载体构建,通过对拟南芥转基因研究对这些基因的功能进行了分析。获得如下结论:(1)在不同浓度的盐胁迫下对角果木总蛋白的表达进行测定,结果表明随时间的增加角果木蛋白含量先减后增,这表明盐胁迫可以调节角果木蛋白质数量的变化。(2)提取经7个时间点处理(500mmol·L-1NaCl)的角果木总RNA,进行illumina测序和COG、GO等数据库相关的生物信息分析,并根据转录组所提供的信息查找到了部分角果木差异表达基因的全长CDs序列。(3)根据表达谱分析结果,筛选出40个差异相对较大基因,设计引物,对这其进行RT-PCR和real-timePCR的验证。结果有75%一致性。(4)用半定量RT-PCR结合RACE技术分离出了Mn-SOD等8基因全长CDs。(5)利用LIC-cloning法将筛选的红树角果木耐盐相关的8个基因构建到植物表达载体pJG053上,并转化农杆菌GV3010,浸花法侵染拟南芥获得稳定遗传的T2代转基因植株。(6)将CL2528、CL3363、CL3369、CL3122的转基因的T2转基因拟南芥植株进行耐盐实验,结果发现与未转基因植株比较,CL2528、CL3363转基因的拟南芥生长状况要好,初步说明这两个基因有耐盐相关作用。
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