特异性强的核酸酶是高精度基因组编辑技术有力的工具。我们最近发现的DNA介导NgAgo核酸酶体系已成为最新基因组编辑工具,它能方便有效的编辑真核细胞基因组。本次实验的目的在于,使用NgAgo/g DNA编辑工具对人类基因组造成DNA双链断裂（DSB）,利用细胞自身的非同源性末端联合（NHEJ）损伤修复机制,将增强的绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点敲入内源性DYRK1A基因最后一个外显子处,利用DYRK1A基因的启动子驱动EGFP c DNA表达绿色荧光蛋白,通过荧光倒置显微镜更精确的示踪基因敲入（KI）人类基因组的表达情况,完成基因组编辑实验。我们首先将NgAgo基因序列构建到真核表达载体上,让NgAgo蛋白能在人类细胞中成功表达,用标准的分子克隆方法构建了重组载体NLS-NgAgo-Red。我们选用了EGFP绿色荧光蛋白做为KI的片段,它可以最直接的通过荧光倒置显微镜观察到。此donor包含了整个EGFP读码框和SV40 poly A信号序列。我们找到了在人类细胞普遍表达的DYRK1A基因,选择在其最后一个外显子上做靶位点设计为g DNA。通过多次的细胞培养,观察,检测,最终得到一批干净无污染的Hela细胞,将准备好的质粒,g DNA,donor共转染到Hela细胞,培养48h后荧光倒置显微镜检测到有EGFP蛋白的产生,而不加NgAgo表达质粒的对照组却没有看到绿色荧光。由此初步推测实验组的KI成功。再经过提取细胞基因组,PCR扩增,测序分析,我们最终确定:在g DNA、NgAgo的作用下,人类基因组中定向KI成功。