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背景与目的:血管增生、突触形成是癫痫形成过程中常见的病理变化。有研究证实,星形胶质细胞分泌的血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1,TSP-1)在突触形成、血管增生中发挥重要作用,因此我们推测,TSP-1可能参与了癫痫形成和发作。鉴于TSP-1在癫痫发病中的作用不清楚,我们研究KA(Kainic acid,KA)诱导的大鼠急性大发作模型和杏仁核电刺激诱导大鼠癫痫形成模型中TSP-1的变化,并分析其变化在血管增生和突触形成中的作用及机制。方法:本论文分为两大部分。第一部分,采用侧脑室注射KA诱导制备急性大发作模型,通过western blotting和免疫组织化学、流式细胞检测等方法检测血管生成标记物VEGF/CD34的表达,检测脑内伊文氏蓝渗出含量评价血管屏障破坏情况,并通过基因干预(siRNA抑制TSP-1)或者药物干预(LSKL阻断TGF-β1的激活;PPADS/活性蓝-2阻断P2/P2Y4受体)的方法,观察TSP-1/TGF-β1/Smad2/3通路上相关蛋白表达变化;评估干预措施对血脑屏障和血管生成的影响;观察并分析动物行为学和脑电变化,评估干预措施对动物大发作的作用。第二部分,采用杏仁核电刺激癫痫模型,用western blotting和免疫组织化学、流式细胞检测等方法检测突触和兴奋性突触的标记物Synapsin-I/PSD95/GluT以及TSP-1/TGF-β1通路蛋白的表达变化;并通过基因干预(siRNA抑制TSP-1的合成)或者药物干预(LSKL阻断TGF-β1的激活;PPADS/活性蓝-2)分别干预P2Y4/TSP-1/TGF-β1通路的不同靶点,观察下游的分子表达变化以及对动物癫痫进程和突触生成。结果:1)KA诱导的大鼠急性大发作模型中,血管标记物VEGF/CD34和TSP-1的表达同步增加;PPADS/活性蓝-2/siRNA/LSKL干预后,减少了 Smad2/3磷酸化,减弱了血管增生和血脑屏障破坏、减轻了大发作的严重程度。2)杏仁核电刺激癫痫模型中,突触和兴奋性突触的标记物(Synapsin-I和PSD95/GluT)随癫痫进展在脑内部分区域(如海马)出现了规律的增强;并伴随着TSP-1/TGF-β1通路表达增强;药物或基因手段抑制TSP-1表达,或者抑制TGF-β1激活,突触表达增强得到部分逆转,癫痫发作严重程度明显减弱。结论:P2R/TSP-1/TGF-β1通路可能参与KA诱导的急性大发作动物的血管生成/血脑屏障破坏以及杏仁核电点燃诱导癫痫模型的突触生成,适当抑制该通路可以抑制血管生成和突触形成,抑制癫痫的发展和减轻大发作的严重程度。