基因芯片检测转基因植物方法学的建立

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转基因技术的发展给人们的生活带来了更多的机遇。通过生物技术可使品种改良如产量增加、品质提高、抗性(抗虫、抗旱、抗病、抗逆)增强等,但200多年来的工业文明告诉人类,科学是一把双刃剑,在给人类带来无限益处的同时,也引起了人们的担忧。从转基因技术诞生至今,人类一直进行着有关转基因技术的食品安全、环境风险、生态安全、社会伦理道德以及国际经济和政治安全等一系列问题的思考及争论。因此,转基因植物的检测的愈发重要,只有准确地检测转基因食品,才能有效的对上市的转基因食品进行监控。 本论文建立了用基因芯片检测转基因植物的方法,利用基因芯片信息量大的特点,能同时对转基因植物中的启动子、终止子、报告基因进行检测。和PCR这些传统检测转基因植物的方法相比,具有灵敏度高、特异性高,操作简便、快速,自动化程度高及结果准确率高等特点。 和以往基于杂交检测原理的基因芯片不同,我们探讨了基于引物延伸原理的芯片检测方法。利用此种基因芯片对转基因样品进行检测,能够实现样品扩增、标记、检测的一体化,大大缩短了检测时间,也为目前基因芯片中大片段待测样品和小片段探针杂交的技术难题提供了一种新的思路。我们利用此种芯片实现了对质粒pCAMBIA1301中所含的四个基因GUS、35S启动子、hpt、aadA的特异性同步检测。 我们还讨论了利用微测序基因芯片来检测转基因植物,基于微测序检测原理的基因芯片,不仅通过探针和目的片段杂交时的热稳定性来区分样品,还利用了DNA聚合酶的特异性延伸来对样品进行检测,因此理论上具有更高的特异性。我们初步利用质粒pCAMBIA1301中GUS、35S启动子、hpt、aadA基因的PCR产物作为检测的对象,实现对这几个基因的特异性检测,为以后直接利用质粒或基因组DNA作为检测对象奠定了基础。 通过本论文的研究表明,基因芯片是一种可行有效的转基因植物检测方法,具有广阔的应用前景。
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