目的:观察灵龟八法按时开穴灸对衰老模型大鼠端粒(Telomere)、端粒酶逆转录酶(TERT)、抑癌基因p53、视网膜母细胞瘤(Rb)、蛋白激酶C(PKC)、蛋白磷酸酶2A(PP2A)表达的影响,从端粒及细胞周期调控因子角度探讨灵龟八法延缓衰老的机制,为灵龟八法延缓衰老提供更多实验依据。方法:选用雄性SD大鼠共40只,按随机数字法分为正常组、模型组、灵龟八法预防组、灵龟八法治疗组,每组10只。除正常组外,其余3组大鼠腹腔注射D-半乳糖溶液制备亚急性衰老模型,共42天。造模期间正常组正常称重和抓取,不注射任何药水;灵龟八法预防组在造模的同时给予灵龟八法按时开穴灸,造模结束后继续常规饲养;灵龟八法治疗组在造模期间不做治疗,在造模结束后的次日进行灵龟八法按时开穴灸,共28天。实验结束的次日处死全部大鼠,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肝组织中TERT、p53、Rb的蛋白含量,用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测大鼠肝组织中相对端粒长度和TERT、p53、Rb的m RNA表达,用免疫荧光法检测大鼠肝组织中PKC、PP2A活性的表达。结果:(1)与正常组相比较,模型组大鼠肝组织中相对端粒长度明显缩短,差异有统计学意义(p<0.01);灵龟八法预防组和灵龟八法治疗组大鼠相对端粒长度显著长于模型组,差异有统计学意义(p<0.01)。(2)与正常组相比较,模型组大鼠肝组织中p53和Rb的表达显著升高,差异有统计学意义(p<0.01);灵龟八法预防组和灵龟八法治疗组大鼠p53的蛋白含量显著低于模型组(p<0.05),p53和Rb的m RNA表达、Rb的蛋白含量均显著低于模型组,差异有统计学意义(p<0.01)。(3)与正常组相比较,模型组大鼠肝组织中TERT表达显著较低,差异有统计学意义(p<0.01);灵龟八法预防组和灵龟八法治疗组大鼠TERT表达显著高于模型组,差异有统计学意义(p<0.01)。(4)与正常组相比较,模型组大鼠肝组织中PKC表达显著较低,差异有统计学意义(p<0.01);灵龟八法预防组和灵龟八法治疗组大鼠PKC表达显著高于模型组,差异有统计学意义(p<0.01)。(5)与正常组相比较,模型组大鼠肝组织中PP2A表达显著较高,差异有统计学意义(p<0.01);灵龟八法预防组和灵龟八法治疗组大鼠PP2A表达显著低于模型组,差异有统计学意义(p<0.01)。(6)灵龟八法预防组与灵龟八法治疗组相比较统计学差异不明显(p>0.05),但从数据看来预防组优于治疗组。结论:(1)灵龟八法按时开穴灸能有效延缓衰老大鼠肝组织中端粒长度缩短的时间,维持染色体的稳定;能有效增加衰老大鼠肝组织中TERT的表达,激活端粒酶的活性以维持细胞增殖,延缓细胞衰老的进程。(2)灵龟八法按时开穴灸能有效增加衰老大鼠肝组织中PKC的表达,下调衰老大鼠肝组织中p53、Rb的表达,下调衰老大鼠肝组织中PP2A的表达,增加细胞的抗衰老能力,控制衰老信号的进一步传导,使停滞的细胞周期得以恢复,延缓细胞衰老的进程,达到延缓衰老的目的。(3)灵龟八法对衰老有良好的预防及治疗效果,治疗组能达到与预防组相当的疗效。但从各项数据看来预防组则稍优于治疗组,这也提示我们对于延缓衰老,早做预防可能效果更好。