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研究目的研究生物标志物HER2、P27、CyclinD1、P53、PTEN及EGFR在恶性间皮瘤的表达与其生物学特点,并探讨上述标志物及各种临床病理参数与患者生存时间的关系。寻找新的与恶性间皮瘤预后相关的分子标记物,以期为临床提供更多的信息,指导治疗,减少复发与转移。研究方法本实验为回顾性研究:复习解放军总医院病理科1980年7月-2008年7月行手术切除或尸检并经福尔马林固定、常规石蜡包埋的恶性间皮瘤137例,其中4例为尸检病例。经复读切片并结合相关的免疫组化:包括Calrentinin、CK5/6、D2-40、WT-1、Vimentin、CEA及EMA等,并结合部分病例的电镜特点,获得诊断较为明确的标本,随后按照WHO组织分类及1994年国际间皮瘤组织提出的TNM分期系统,查阅相关病历并对全部病例进行随访,得到临床资料齐全并成功获访的病人共60例(其中4例为尸检)。光镜下复习60例恶性间皮瘤病例病理切片,观察瘤组织病理分类、TNM分期、有无坏死及转移等病理特点。免疫组化染色:采用PV6000二步法,检测60例恶性问皮瘤中的P27、HER2、CyclinD1、P53、PTEN及EGFR六种生物标志物表达状况,分析其与临床、病理及预后的关系。FISH技术检测恶性问皮瘤HER2基因的扩增:运用免疫荧光原位杂交(fluorescence in situhybridization,FISH)技术,用HER-2探针和17号染色体着丝粒特异性探针,检测60例间皮瘤患者HER-2基因扩增情况,分析其与HER-2蛋白表达的关系。实时定量PCR检测EGFR基因突变:20例EGFR阳性的恶性间皮瘤病例,提取恶性间皮瘤石蜡标本的DNA,采用实时定量聚合酶链反应(Real-timeQuantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)技术观察其EGFR基因第18、19、20及21外显子的突变情况。结果各生物标志物的在恶性间皮瘤石蜡切片中免疫组织化学表达的阳性率分别为HER2 3.3%(2/60)、P27 58.3%(35/60)、CyclinD1 26.7%(16/60)、P5338.3%(23/60)、PTEN 23.3%(14/60)及EGFR 45.0%(27/60)。与组织分型有关的是CyclinD1,上皮型恶性间皮瘤中CyclinD1的阳性表达率明显低于肉瘤型和混合型恶性间皮瘤(P=0.012)。与转移相关的是P27和P53,P27未转移组的阳性率明显高于转移组(P=0.016),而P53转移组阳性率明显高于未转移组(P=0.039)。此外P53与TNM分期相关,恶性间皮瘤中Ⅲ-Ⅳ期组P53阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ期组(P=0.023)。而EGFR、HER2及PTEN的阳性表达与患者性别、年龄、部位、组织分型、大体类型、TNM分期、有无转移、坏死及石棉接触等均无关(P均>0.05)。单因素生存分析显示,P27、PTEN、组织分型、年龄、转移及TNM分期共6种因素与恶性间皮瘤患者的术后生存时间有关:P27阳性表达组患者的总体生存时间明显长于阴性的患者(P=0.026);PTEN阳性表达组患者的生存时间均较阴性表达组患者的生存时间长(P=0.042);恶性间皮瘤患者的年龄小于55岁(P=0.030)、组织分型为上皮型(P=0.000)、无转移(P=0.004)及TNM分期为Ⅰ-Ⅱ期(P=0.000)均为预后较好的因素。最终Cox多因素总体生存分析显示,PTEN、年龄、组织类型及TNM分期4种因素入选,PTEN阳性表达、年龄小于55岁、上皮型恶性间皮瘤及TNM分期为Ⅰ-Ⅱ期的患者生存时间长,预后较好。恶性间皮瘤中HER2基因扩增的检测,对2例HER2免疫组化染色(+)的恶性间皮瘤运用荧光原位杂交(fluorescence in situhybridization,FISH)技术进行检测,均未发现HER2基因的扩增。恶性间皮瘤中EGFR基因突变的检测,对20例恶性间皮瘤的实时定量PCR检测结果显示,仅有1例发生19号外显子的缺失突变,其余均为野生型EGFR,提示患者恶性间皮瘤患者可能不能从EGFR基因耙向治疗中受益。对于EGFR基因表达的突变与指导临床治疗尚需大样本容量进一步研究。结论1、PTEN、年龄、组织类型及TNM分期是恶性间皮瘤生存时间的独立预后因子。2、P27、CyclinD1、P53、PTEN、HER2及EGFR均与恶性间皮瘤的发生、发展有一定关系,上述生物标志物表达的变化可能对恶性间皮瘤的演化和进展起重要作用,并可能成为新的临床辅助诊断和监测预后及指导用药的指标。3、恶性间皮瘤中HER2蛋白表达(2/60,3.3%)少见,未检测到HER2基因的扩增。4、在恶性问皮瘤中,EGFR蛋白表达(27/60,45.0%)多见,但其基因第18-21号外显子的突变罕见,本组20例恶性间皮瘤仅1例发生19号外显子的缺失,提示恶性间皮瘤患者可能不能从EGFR基因靶向治疗中受益。尚需大量样本进一步研究。