【目的】每年流感给人类健康和社会经济带来巨大损失,疫苗免疫是预防流感最行之有效的手段。现阶段国内流感疫苗生产仅依靠鸡胚,细胞制备的疫苗与鸡胚培养制备的流感疫苗相比,可以突破鸡胚培养过程的限制,而MDCK细胞是当前最受瞩目的流感疫苗的细胞基质之一。目前的疫苗株在细胞上产量较低等因素限制了疫苗以细胞培养为主要的生产方式。本研究通过利用反向遗传学及自然重配的方法,构建了可以在MDCK细胞上大量增殖,并且有较高滴度的细胞适应性流感毒株,并对其免疫原性进行评价。【方法】流感疫苗株的重组是利用反向遗传学的方法,对鸡胚源H1N1毒株（IVR-180）基因组进行RT-PCR,再将所获得的目的序列连接至PHW2000质粒上,将8个质粒共转染293T与MDCK细胞,通过病毒在MDCK细胞扩增获得初代重组病毒株,将重组病毒株进行连续的极限稀释法传代培养,使用空斑筛选获得高滴度的毒株,制备成灭活疫苗并通过小鼠模型进行免疫原性评价。流感病毒株的重配是利用不同毒株自然重配的原理,以减毒株H5N1疫苗株（NIBRG-14）为骨架,替换H1N1与（IVR 180）的部分序列,重配出病毒株。将两种病毒共感染MDCK,在后续的连续培养中增加H5N1亚型标准血清加压筛选,连续两代的H5N1亚型标准血清加压筛选后,通过连续的交叉血凝抑制,选取H1病毒增加比例、血凝滴度最高的样进行空斑挑选,并对挑选病毒进行RT-PCR鉴定,挑选发生自然重配的无H5N1表面HA蛋白的重配毒株,灭活毒种并通过小鼠实验进行免疫原性评价。【结果】首先,通过病毒拯救技术获得一株在MDCK细胞上稳定增殖并且10~7CCID50/m L的新型H1N1毒株,命名为r H1-J3,该毒株制备的灭活抗原在免疫小鼠后可诱导高中和活性的抗体。其次,通过重配H1N1和H5N1获得了一株HA、NA、NS、M、NP来源H1,PA、PB1、PB2来源H5的新型H1毒株,毒力较原始毒株（原始滴度）有明显提升(106.5CCID50/m L),命名为r H1-C7,该毒株制备的灭活疫苗免疫小鼠诱导了高中和活性的抗体。【讨论】通过反向遗传重组及重配获得了两株能够在MDCK细胞稳定增殖,并且高滴度的H1N1亚型流感毒株,两株流感病毒株制备的灭活疫苗可以诱导高效价的中和活性抗体,为实现以MDCK细胞为基质的流感疫苗短时间内大量且快速生产提供了有力的保障。