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[目的]本实验通过以50μg/ml和100μg/ml浓度梯度的云南白药溶液作用于体外复合的人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)-Bio-Oss Collagen支架,将支架植入裸小鼠皮下进行成骨分化研究,探讨云南白药是否能在动物体内诱导HPDLFs成骨分化,为云南白药应用于牙周病临床治疗提供实验数据。[方法]取临床因正畸需要拔除的前磨牙,刮取根中1/3牙周膜组织,通过组织块培养法原代培养HPDLFS。取第4代HPDLFs,2次沉淀法将HPDLFs接种于预处理好的Bio-Oss Collagen支架上进行体外复合培养。体外构建的HPDLFs-Bio-Oss Collagen复合体分成以下4组：加入浓度为50μg/ml及100μg/ml的云南白药溶液作为白药组、lOOng/ml的重组人骨形成蛋白-2(Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2, rhBMP-2)作为阳性对照,1%胎牛血清(Fetal bovine serum, FBS)的a-MEM培养基作为阴性对照。体外培养7天后根据分组以4个位点分别植入裸小鼠背部,于术后8周取材进行HE染色及免疫组化检测骨涎蛋白(Bone sialoprotein, BSP)、骨钙素(Osteocalcin OC)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)及Ⅰ型胶原(Type I Collagen, CON-1)的表达,研究体内云南白药对HPDLFs在Bio-Oss Collagen支架上成骨分化影响,并对实验数据进行统计学分析。[结果]1HPDLFs与Bio-Oss Collagen支架复合体移植入裸小鼠背部皮下培养,HE染色及免疫组织化学(Immunoohistochemistry, IHC)结果显示Bio-Oss Collagen边缘及内部可见大量长梭形细胞附着并呈放射状生长,支架材料有部分降解；2.HE染色可见在骨支架上有新生毛细血管及成骨细胞生成。HE染色新生毛细血管及成骨细胞统计结果显示：复合物在浓度为100μg/ml的云南白药溶液组与50μg/ml云南白药溶液组、rhBMP-2溶液及空白对照组之间存在显著差异,P<0.001：3.IHC切片可见在动物体内实验中HPDLFs在云南白药作用下分化大量BSP、OC、OPN及CON-I。IHC统计结果显示：实验组与对照组间在BSP、OC、OPN及CON-I表达强度上存在显著性差异,其中100μg/ml的云南白药组中4种蛋白的阳性表达面积、平均光密度及积分光密度与50μg/ml云南白药溶液、rhBMP-2溶液及空白对照组之间存在显著差异,P<0.001。[结论]1100μg/ml浓度的云南白药溶液对植入动物体内的HPDLFs-Bio-Oss Collagen复合物具有促进其成骨细胞及毛细血管的生成的作用；2.50μg/ml和100μg/ml浓度的云南白药溶液对植入动物体内的HPDLFs-Bio-Oss Collagen复合物均可促进其成骨蛋白BSP、OC、OPN及CON-I的表达。其中100μg/ml浓度的云南白药溶液促进作用最强。