【摘 要】
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羊痒病是一种传染性海绵状脑病(TSEs),是由正常的宿主细胞型朊蛋白构象改变且在中枢神经系统中积累引起的。山羊痒病是由以α螺旋为主的细胞型朊蛋白Pr Pc转变为富含β折叠的
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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羊痒病是一种传染性海绵状脑病(TSEs),是由正常的宿主细胞型朊蛋白构象改变且在中枢神经系统中积累引起的。山羊痒病是由以α螺旋为主的细胞型朊蛋白Pr Pc转变为富含β折叠的致病型朊蛋白Pr Psc引起的。Pr Pc基因(PRNP)的表达水平是痒病起始、发展和传染的必要条件。关于山羊Pr Pc表达的转录调控研究尚不够深入。本实验利用生物信息学和比较基因组学对山羊PRNP基因的非翻译区调控序列进行分析;并结合荧光素酶报告基因系统探究山羊PRNP基因的启动子区域。结果将为防控山羊痒病的发生提供重要的理论依据。本实验中,对山羊PRNP基因(Gen Bank登陆号为EF870890.1)5’侧翼序列和内含子1序列特征进行分析,并对这两个区域进行克隆与鉴定。利用分子克隆和亚克隆策略,构建了山羊PRNP基因包含5’侧翼区和外显子1区域(3776-6107bp)的7个不同长度的缺失重组载体,同时构建了包含内含子1区域(5129-6891bp)的5个不同长度的缺失重组载体,利用双荧光素酶报告系统在SH-SY5Y细胞中检测其活性。结果表明山羊PRNP基因核心启动子区域定位在4570-5171bp(包含外显子1)。对该区域进行转录因子结合位点预测,发现该区域有多个潜在转录因子结合位点,为山羊PRNP基因的关键启动子区。在内含子1区未发现具有启动子活性的区域。对山羊PRNP基因核心启动子区(4570-5171bp)进一步进行缺失,构建了4个p GL3-缺失片段重组载体,利用双荧光素酶报告系统在SH-SY5Y细胞中检测其活性。结果表明核心启动子区存在的4个motif不影响基因启动子的活性。对内含子1进行缺失突变,表明在6002-7220bp内存在抑制基因转录的转录因子结合位点。
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