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研究目的：
神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)发源于交感神经系统，是小儿最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，早期转移多，70%的神经母细胞瘤患儿在初次确诊的时候就可发现有转移的现象，故有小儿“癌王”之称。除常见的肺、骨、脑转移外，60%病例具有全身骨髓转移，是神经母细胞瘤患者的主要死因。此外，其高度侵袭转移特性也是神经母细胞瘤在整个恶性肿瘤疾病中极具特点的现象。因此，探明神经母细胞瘤的转移机制、控制转移是决定预后的关键，也是神经母细胞瘤治疗面临的最具挑战性的问题。目前临床上对恶性程度高、发生转移早的高危神经母细胞瘤病人常采用超大剂量联合化疗，尽管开始时对治疗有效，但化学合成药物毒副作用大，易复发，效果不佳。而天然化合物毒副作用小，具有靶向杀伤肿瘤细胞的特点，是目前抗肿瘤研究的热点。因此从中寻找抗神经母细胞瘤转移的天然药物具有重要意义。本实验室前期已报道2，3-吲哚醌(Isatin)可在体外有效抑制神经母细胞瘤的增殖，本研究旨在进一步探究2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤细胞侵袭和转移的影响及其可能的分子机制。
研究方法：
1，体外培养人源神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞，加入不同浓度的2，3-吲哚醌。2，通过CCK8法测定不同浓度的2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖活力的影响3，通过Transwell实验检测不同浓度2，3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞侵袭能力的影响。4,通过划痕实验测定不同浓度2，3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞迁移能力的影响。5，通过Rt-PCR和q-PCR检测LSD1与PTENmRNA的相对表达量并做统计学分析。6,通过WES蛋白印迹定量分析系统测定LSD1及其底物H3K4m1，PTEN及其相关信号分子SHC，FAK，PI3K,AKT的蛋白表达量或蛋白磷酸化水平并做统计学分析。
研究结果：
研究结果显示，随着2，3-吲哚醌浓度的升高，神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖能力受到抑制、而且其细胞的侵袭能力和迁移能力均相应降低。表明2，3-吲哚醌的确可以抑制神经母细胞瘤细胞的侵袭与迁移能力，且其抑制作用呈浓度梯度依赖性。实时荧光定量PCR实验结果显示，随着2,3-吲哚醌浓度的升高，不同组别神经母细胞瘤细胞中LSD1mRNA相对表达量并没有明显变化，而细胞中PTENmRNA的相对表达量随着所加入2，3-吲哚醌的浓度的增加而相应升高(p＜0.01)。除此之外，WES蛋白印迹定量分析系统的实验结果表明，随着所加入2，3-吲哚醌浓度增加，不同组别神经母细胞瘤细胞中LSD1的底物H3K4m1表达水平升高，表明H3K4甲基化水平降低，说明LSD1酶的活性受到抑制。而且不同组别神经母细胞瘤细胞中PTEN蛋白的表达水平相应增加(p＜0.01)；而PTEN下游相关分子PI3K，AKT，SHC，FAK的磷酸化水平均相应降低(p＜0.01)。表明PTEN下游与肿瘤侵袭迁移相关的PI3K/AKT信号通路和SHC/FAK信号通路均受到抑制。
研究结论：
2，3-吲哚醌可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖，侵袭与迁移能力。此抑制作用可能通过PTEN相关信号通路发挥作用，且抑制作用呈剂量依赖性。
神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)发源于交感神经系统，是小儿最常见的恶性肿瘤之一，其恶性程度高，早期转移多，70%的神经母细胞瘤患儿在初次确诊的时候就可发现有转移的现象，故有小儿“癌王”之称。除常见的肺、骨、脑转移外，60%病例具有全身骨髓转移，是神经母细胞瘤患者的主要死因。此外，其高度侵袭转移特性也是神经母细胞瘤在整个恶性肿瘤疾病中极具特点的现象。因此，探明神经母细胞瘤的转移机制、控制转移是决定预后的关键，也是神经母细胞瘤治疗面临的最具挑战性的问题。目前临床上对恶性程度高、发生转移早的高危神经母细胞瘤病人常采用超大剂量联合化疗，尽管开始时对治疗有效，但化学合成药物毒副作用大，易复发，效果不佳。而天然化合物毒副作用小，具有靶向杀伤肿瘤细胞的特点，是目前抗肿瘤研究的热点。因此从中寻找抗神经母细胞瘤转移的天然药物具有重要意义。本实验室前期已报道2，3-吲哚醌(Isatin)可在体外有效抑制神经母细胞瘤的增殖，本研究旨在进一步探究2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤细胞侵袭和转移的影响及其可能的分子机制。
研究方法：
1，体外培养人源神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞，加入不同浓度的2，3-吲哚醌。2，通过CCK8法测定不同浓度的2，3-吲哚醌对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖活力的影响3，通过Transwell实验检测不同浓度2，3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞侵袭能力的影响。4,通过划痕实验测定不同浓度2，3-吲哚醌对SH-SY5Y细胞迁移能力的影响。5，通过Rt-PCR和q-PCR检测LSD1与PTENmRNA的相对表达量并做统计学分析。6,通过WES蛋白印迹定量分析系统测定LSD1及其底物H3K4m1，PTEN及其相关信号分子SHC，FAK，PI3K,AKT的蛋白表达量或蛋白磷酸化水平并做统计学分析。
研究结果：
研究结果显示，随着2，3-吲哚醌浓度的升高，神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖能力受到抑制、而且其细胞的侵袭能力和迁移能力均相应降低。表明2，3-吲哚醌的确可以抑制神经母细胞瘤细胞的侵袭与迁移能力，且其抑制作用呈浓度梯度依赖性。实时荧光定量PCR实验结果显示，随着2,3-吲哚醌浓度的升高，不同组别神经母细胞瘤细胞中LSD1mRNA相对表达量并没有明显变化，而细胞中PTENmRNA的相对表达量随着所加入2，3-吲哚醌的浓度的增加而相应升高(p＜0.01)。除此之外，WES蛋白印迹定量分析系统的实验结果表明，随着所加入2，3-吲哚醌浓度增加，不同组别神经母细胞瘤细胞中LSD1的底物H3K4m1表达水平升高，表明H3K4甲基化水平降低，说明LSD1酶的活性受到抑制。而且不同组别神经母细胞瘤细胞中PTEN蛋白的表达水平相应增加(p＜0.01)；而PTEN下游相关分子PI3K，AKT，SHC，FAK的磷酸化水平均相应降低(p＜0.01)。表明PTEN下游与肿瘤侵袭迁移相关的PI3K/AKT信号通路和SHC/FAK信号通路均受到抑制。
研究结论：
2，3-吲哚醌可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖，侵袭与迁移能力。此抑制作用可能通过PTEN相关信号通路发挥作用，且抑制作用呈剂量依赖性。