布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病是一种自然疫源性传染病,可引起多种动物和人感染,危害极其严重。布鲁氏菌的致病性主要表现为炎性因子造成的炎症损伤,其中发挥关键作用的是Ⅳ型分泌系统(T4SS),然而T4SS的功能是由分泌蛋白介导的。前期研究证明BMEI0340蛋白是T4SS的分泌蛋白,通过比对分析发现:该蛋白与多种细菌中调节炎性因子表达的脂蛋白Pal同源,因此推断该蛋白可能与调节炎性因子表达有关。另外有大量研究表明:脂蛋白Pal具有良好的免疫原性。本研究通过实验确定分泌蛋白BMEI0340是否参与调控炎性因子表达,进而鉴定其关键功能区,并对该蛋白免疫原性进行研究。本研究从以下两方面进行开展,结果如下:1.确定分泌蛋白BMEI0340是否参与调控炎性因子表达并鉴定其关键功能区利用BMEI0340蛋白编码基因序列设计引物,PCR扩增BMEI0340基因,构建重组表达质粒化转感受态细胞,诱导表达蛋白。经WB验证表达后,将BMEI0340蛋白纯化,获得高纯度蛋白刺激鼠源巨噬细胞,测定炎性因子的表达水平。结果显示:BMEI0340蛋白可以上调与布鲁氏菌病发生、发展密切相关的细胞因子TNF-α的表达。为确定上调TNF-α表达的关键功能区,将BMEI0340蛋白截短表达,再次孵育细胞,测定细胞因子表达水平。结果显示:上调TNF-α表达关键功能区在编码BMEI0340蛋白的70-129氨基酸区间。为布鲁氏菌病治疗性药物的筛选以及日后的防控工作提供了重要理论和研究基础。2.分泌蛋白BMEI0340免疫原性研究将纯化后BMEI0340蛋白免疫小鼠,免疫结束后检测小鼠免疫水平。ELISA检测其抗体水平,结果显示:BMEI0340蛋白具备抗原反应原性,并能引起很强的体液免疫反应。MTT法测定蛋白免疫小鼠后细胞免疫水平,结果显示:该蛋白能够引起一定程度的细胞免疫,可见BMEI0340蛋白有作为布鲁氏菌病亚单位疫苗研发的潜力。