论文部分内容阅读
目的:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种严重的全身性自身免疫性疾病,主要侵犯外周关节,因滑膜增生、炎性细胞浸润导致关节肿痛,最终因关节骨质破坏而致残。中医认为肾主骨生髓,肾虚可能与RA疾病活动、病情进展、预后等密切相关。在类风湿关节炎患者中,疾病活动的确定已成为RA管理的重要组成部分。本研究的目的是研究肾虚与RA患者的疾病活动之间的关系,并寻找肾虚型RA病-证诊断的有用生物标志物。方法:纳入RA患者60例,根据中医证型诊断标准分为肾虚组和非肾虚组,收集临床资料（性别、年龄、发病年龄、病程、肿胀关节数、压痛关节数、红细胞沉降率、C-反应蛋白、血小板计数、类风湿因子、抗CCP抗体,CDAI、SDAI、DAS28评分,HAQ评分）,并进行组间比较的统计学分析。抽取13例RA患者的血清样本,以及8例体检中心的健康人血清样本,分为RA肾虚证组、RA非肾虚证组和健康对照组。采用蛋白质组学技术（BCA法）对各组血清样本进行蛋白定量,再以液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）联用技术进行检测。所得质谱数据用Maxquant软件（版本1.6.17.0）在人源Fasta数据库进行搜索鉴定。筛选出的差异蛋白中,当组间比较差异倍数≥1.5（上调）或者≤0.7（下调）,且检验q-value<0.05时,定义为组间差异蛋白。生物信息学分析采用数据包“ggplot2”,“Venn Diagram”,“Coplex Heatmap”,“RColor Brewer”,“corrplot”,对所鉴定的差异蛋白进行KEGG通路分析、GO注释,“pearson”聚类分类,并使用R语言（版本4.0.2）编程绘制基因表达热图和基因富集气泡图。成果:1、本研究纳入肾虚型RA患者40例,非肾虚型RA患者20例,两组男女比例相同,为1:5.67。肾虚组的平均发病年龄是44.66±11.01岁,两组比较无统计学差异（P>0.050）。肾虚组的病程更长,平均为9.31±7.26年,两组比较差异有统计学意义（P<0.050）。2、肾虚组的炎症指标ESR平均为57.33±21.95mm/h,CRP平均为32.66±29.08mg/L,较非肾虚组升高,但两组比较,P>0.050,差异无统计学意义。肾虚组的自身抗体RF滴度平均为383.03±449.48 IU/m L,明显高于非肾虚组（195.46±205.23 IU/m L）,两组比较,P<0.050,差异有统计学意义。肾虚组的anti-CCP平均为132.69±77.34U/m L,与非肾虚组比较差异无统计学意义。3、肾虚组的临床评价指标和疾病活动度都更高,两组间比较,肿胀关节数（P=0.014）、压痛关节数（P=0.043）、患者总体评估（P=0.012）、疾病活动度DAS28-CRP评分（P=0.012）、CDAI（P=0.010）、SDAI（P=0.010）,差异都有统计学意义,DAS28-ESR评分（P=0.007）、HAQ（P=0.002）和医生总体评价（P=0.006）都具有显著统计学意义（P<0.010）。4、对13例RA与8例健康人的血清样品进行蛋白定量,共鉴定>1000个蛋白,241种蛋白对比健康对照组有显著差异。与健康对照组比较分析,RA肾虚证组组间差异蛋白有96种,上调的占50种;高疾病活动组组间差异蛋白有111种,上调的占60种;而非肾虚证组组间差异蛋白仅76种。用基因ID表示筛选出的差异蛋白,241个差异基因中有49个是类风湿关节炎靶基因。在肾虚证组和高疾病活动组,SAA1、CRP、S100A9、SAA2、FGB、F9、MBL2、TNC、PRG4、COMP等表达量明显上调,而TNXB、CAT、CA1、PRDX2、IGFBP5、GSN、ENPP2、PON1等表达量明显下调,与健康对照组及非肾虚组相比有明显差异。5、KEGG信号通路富集分析,结果示241个差异基因主要富集于补体和凝血级联反应、细胞外基质-受体相互作用、黏着斑、血小板活化、金黄色葡萄球菌感染等。6、通过对RA肾虚组显著上调蛋白进行GO注释分析,发现其相关生物功能主要涉及血小板脱粒、急性期反应、补体激活、细胞外基质组织、纤维蛋白溶解、凝血、蛋白水解、受体介导的内吞作用、先天免疫反应、血小板活化等生物学过程,分子功能主要是肝素结合、钙离子结合、抗氧化活性、受体结合和细胞粘附分子结合。下调蛋白主要涉及细胞粘附、甘油三酸酯代谢过程、胆固醇代谢过程等。结论:肾虚与RA疾病活动密切相关,肾虚患者表现为更严重的临床症状体征和疾病影响。肾虚型RA有更多的蛋白反应参与信号通路调节和生物学过程,可能具有更复杂的生理-病理免疫反应机制和相互作用。上调差异蛋白SAA1、SAA2、S100A9、FGB、FGG、TNC、COMP、MBL2、PRG4和下调差异蛋白TNXB、CAT可能是肾虚型RA疾病严重程度评估和病-证诊断的有用生物标志物,并可能提供有关疾病活动的其他信息。