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目的构建重组人内皮抑素(recombinant human Endostatin,rhES)的毕赤酵母真核表达系统;观察rhES(恩度Endostar)的对角膜新生血管及裸鼠乳腺癌MCF-7的抑制作用,为进一步临床研究做准备。方法采用RT-PCR技术从人肝中扩增人ES基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9,通过电转化将线化的重组质粒转化到毕赤酵母GS115细胞,摇床培养并筛选出内皮抑素高表达菌株。然后应用rhES(Endostar)进行动物有效性实验。动物实验(一)选取新西兰大白兔20只,采用碱烧伤法制备兔角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)模型,随机分为2组,每组10只。实验组球结膜下注射rhES(Endostar)0.05ml,隔日1次;对照组球结膜下注射生理盐水0.05ml,隔日1次,定期摄相,比较CNV生长面积。利用免疫组化CD34染色的方法,在显微镜下进行微血管计数。动物实验(二)建立人乳腺癌裸鼠模型30只,随机分成2组,每组15只。接种乳腺癌细胞悬液后第1周于种植部位皮下注射rhES(Endostar),隔天1次,剂量为10.0 mg/kg(治疗组),对照组以PBS溶液代替,共用7周。第8周颈椎脱位处死裸鼠,完整剥离肿瘤,检测肿瘤体积、抑瘤率、肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)、癌细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)。结果成功克隆人ES基因,并成功地构建了rhES毕赤氏酵母真核表达系统;筛选出两株重组酵母,经SDS-PAGE分析,均能表达分子量为20kDa的内皮抑素蛋白。动物实验(一)示实验组、对照组的4、7、14、19天的CNV面积分别为(4.06±0.52;5.67±0.61;17.71±1.65;12.09±1.32)mm~2、(4.80±0.63;8.48±1.03;23.91±1.82;16.75±1.79)mm~2;MVD分别为3.60±0.94、5.87±1.44;动物实验(二)示实验组、对照组的肿瘤体积分别为(18 374.6±471.2.)mm~3、(43 604.7±495.1)mm~3,抑瘤率为57.86%;MVD分别为(14.08±3.48)、(25.25±4.73);AI(%)分别为11.54±2.85、4.25±2.18;以上各项数据间差异有显著性(p<0.01)结论rhES毕赤酵母真核表达系统的成功构建,使高效表达ES蛋白成为可能,为生物制药企业批量生产奠定了理论基础;rhES(恩度Endostar)能有效抑制兔角膜血管生成及裸鼠乳腺癌的生长,有广阔的临床应用前景。