三七总皂甙对人肝癌细胞SMMC-7721的影响及分子机制

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目的:探讨三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。 方法:1.采用四唑盐(MTT)比色法观察不同浓度PNS对SMMC-7721细胞增殖的影响;2.流式细胞仪检测细胞周期时相分布及细胞凋亡率;3.流式细胞仪间接免疫荧光染色分析不同浓度PNS作用后细胞p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达水平;4.采用划痕标记/染料示踪技术(scrape loading/dye transfer,SL/DT)观察不同浓度PNS对SMMC-7721细胞GJIC功能的影响;5.采用RT-PCR方法分析不同浓度PNS对SMMC-7721细胞Cx32mRNA、hTERTmRNA表达的影响。 结果:1.MTT结果显示,不同浓度PNS对细胞生长均有一定抑制作用,且同一时间各组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05);100mg/L、200mg/L、400mg/L PNS处理细胞24~72h后,抑制率由17.86%~28.57%增加至25.71%~45.71%,25mg/L、50mg/L PNS对细胞抑制作用较弱,800mg/L PNS则可导致细胞坏死。2.细胞周期分析显示,不同浓度PNS处理细胞72h后,与对照组相比,G0/G1期细胞明显增多,S期和G2/M期细胞减少,且PNS浓度越高,该作用越强,其中400mg/L PNS处理细胞72h后C0/G1期细胞高达87.42%;同时PNS还能诱导SMMC-7721细胞凋亡,并呈明显的剂量效应依赖关系。3.流式细胞仪间接免疫荧光染色分析结果显示,不同浓度PNS处理细胞72h后,p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达阳性率分别由16.89%、89.46%降至7.15%、58.62%。4.SL/DT检测发现,常规培养的SMMC-7721细胞,其Lucifer Yellow(LY)染料局限于划痕两侧细胞内,无明显的荧光染料传输现象,GJIC阴性;而经100mg/L、200mg/L、400mg/L PNS处理细胞72h后,SMMC-7721细胞GJIC功能有不同程度的恢复或增强,且随PNS浓度增高,LY染料传输范围逐渐增大,最远可达3~4层细胞。5.RT-PCR结果显示,不同浓度PNS处理细胞72h后,hTERTmRNA表达与对照组相比明显降低(P<0.05);而CX32mRNA
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