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本研究主要探讨流式细胞仪分离三头水牛精子过程中,精子的活力、运动参数、质膜完整率、线粒体膜电位、项体损伤、DNA损伤和凋亡的变化情况以及分离冷冻解冻后精子ICSI效率。在水牛精子分离、冷冻过程(新鲜、染色后、分离后和冷冻解冻后)中,分别采用荧光显微镜和流式细胞仪检测分析精子品质。结果发现,染色组精子活力与鲜精组相比差异不显著,分离组和冷冻解冻组的精子活力急剧下降,且与前面两组相比差异显著(p＜0.05)。染色组和分离组精子的运动参数(VAP、VSL、VCL、BCF和LIN)与鲜精组相比差异不显著(p＞0.05),而冷冻解冻后除LIN外,其他运动参数值都显著降低,与鲜精组相比差异显著(p＜0.05)。染色和分离过程对精子质膜和线粒体膜电位无明显影响;但冷冻解冻会导致精子质膜完整率和线粒体膜电位均显著下降(p＜0.05)。在顶体损伤方面,冷冻解冻后精子顶体损伤程度显著增加,与前面新鲜、染色后和分离后精子相比,均差异显著(p＜0.05)。水牛精子分离后,其DNA损伤率显著减少(p＜0.05),但冷冻解冻后,精子DNA损伤急剧增加。随着分离过程的进行精子凋亡率逐渐增加,冷冻解冻后精子凋亡率显著高于其它各组(新鲜、染色后和分离后)(p＜0.05)。另外,本研究还利用两头公牛(B和C)的X精子进行单精子显微注射实验,结果发现水牛B和C冷冻解冻分离精子ICSI后囊胚率分别为12.94％和12.12％;在水牛卵母细胞成熟液中添加胱氨酸(cys),再用B和C公牛的X精子ICSI后囊胚率无明显变化。
结论:分离过程对水牛精子质量影响不大,冷冻解冻过程可能是造成精子损伤的主要因素。水牛不同个体分离精子通过ICSI后,其性控胚胎能正常发育至囊胚,且囊胚率可达16.48％。