Ⅰ型糖尿病(TID)是一种器官特异性自身免疫性疾病。在疾病的发生和发展过程中会出现多种自身抗原，包括胰岛素(Ins)、谷氨酸脱羧酶(GAD)、葡萄糖-6-磷酸催化亚基相关蛋白(IGRP)等，其中有些抗原表位在疾病的进程中扮演着重要的角色，如InsB15-23、GAD65P90、IGRP206-214，而且它们之间还存在抗原表位扩展的现象。在Ⅰ型糖尿病进程中，InsB15-23特异性CTL被认为是起始的抗原表位特异性CTL，对于其他抗原表位的暴露及相应CTL的诱导起到了关键性作用;葡萄糖-6-磷酸催化亚基相关蛋白(IGRP)是多种膜系统的组成成分，有报道发现采用毒素偶联的四聚体选择性清除IGRP206-214特异性CTL，能够显著性延迟NOD小鼠Ⅰ型糖尿病的发生。因此本研究选取InsB15-23、IGRP206-214做为研究对象，分别观察mInsB15-23H-2KdSCT、mIGRP206-214H-2KdS CT两种膜表达型单链三聚体对NOD小鼠Ⅰ型糖尿病进程的影响。　　我们首先以本实验室前期构建的mInsB15-23H-2KdSCT真核表达载体为基础，进一步构建mIGRP206-214H-2KdSCT真核表达载体，然后用mInsB15-23H-2KdSCT真核表达载体转染K562细胞，用H-2Kd的抗体作为一抗，通过免疫荧光法确定mInsB15-23H-2KdSCT能够在真核细胞内表达并定位在细胞膜上。　　采用mInsB15-23H-2KdSCT和mIGRP206-214H-2KdSCT两种真核表达载体分别给3周龄、7周龄的NOD母鼠皮下注射，以皮下注射pCDNA3.1(-)真核表达载体组小鼠作为实验对照，发现mInsB15-23-H-2KdSCT组与对照组相比，NOD小鼠的动态血糖、30周龄时平均血糖和发病率均比对照组低，表明mInsB15-23-H-2KdSCT具有显著延迟NOD小鼠血糖升高的趋势，而mIGRP206-214-H-2Kd-SCT组与对照组相比，NOD小鼠的动态血糖、30周龄时平均血糖和发病率均比对照组高，表明mIGRP206-214H-2KdSCT没有延迟NOD小鼠血糖升高的趋势。　　为了探索mInsB15-23H-2KdSCT和mIGRP206-214H-2KdSCT延迟NOD小鼠血糖升高的机制，我们试图制备相关H-2Kd四聚体，用于检测NOD小鼠体内特异性CTL的变化。我们以本实验室前期制备的pET22b-InsB15-23-β-2m-H-2-Kd为基础，通过基因工程的方法成功地构建了pET22b-IGRP206-214-β2m-H-2-Kd原核表达载体。通过包涵体的洗涤、蛋白纯化、复性、超滤、截留、交换buffer、生物素化、去游离生物素、然后将将纯化蛋白与一定量PE标记的链酶亲和素共孵育，成功制备PE标记的IGRP206-214四聚体（IGRP206-214-Tetramer-PE）。选用NOD小鼠作为实验对象，以BALB/c小鼠作为阴性对照，发现NOD小鼠IGRP206-214-Tetramer+、CD8+双阳性细胞高于对照组，且存在统计学的差异，证明我们制备的此四聚体能够用于IGRP206-214特异性CTL的检测。　　我们使用mInsB15-23H-2KdSCT真核表达载体在NOD小鼠3周龄时进行皮下接种、mIGRP206-214H-2KdSCT真核表达载体在NOD小鼠7周龄时进行皮下接种，利用自制的IGRP206-214-Tetramer分析其对外周血IGRP206-214特异性CTL的影响。结果显示过表达mInsB15-23H-2KdSCT的NOD小鼠在16、40周龄时外周血IGRP206-214特异性CTL比例有降低的趋势，但与对照组相比无统计学差异;由于时间的限制，我们没有在最佳的时间点(8周、10周、12周)进行监测，因此过表达mInsBI5-23H-2KdSCT能否降低IGRP206-214特异性CTL频率尚无法判断;而接种了mIGRP206-214H-2KdSCT真核表达载体的NOD小鼠外周血IGRP206-214特异性CTL频率与对照组相比经历了增高、又趋于相同的变化过程，表明mIGRP206-214H-2KdSCT可能具有诱导IGRP206-214特异性CTL增殖的功能。　　全文表明针对疾病早期暴露的抗原(Ins)，过表达mInsB15-23H-2Kd-SCT可以显著降低NOD小鼠T1D的发病率;但是尚无法判断其能否降低NOD小鼠IGRP206-214特异性CTL数量;针对疾病中后期暴露的抗原(IGRP)，尽管过表达mIGRP206-214H-2Kd-SCT能增加NOD小鼠IGRP206-214特异性CTL频率，表现出稍微增高NOD小鼠TID的发病率;总的来说，对TID影响不大。