论文部分内容阅读
当下,乳腺癌是最常发的一种妇科肿瘤,每年因乳腺癌病发而造成死亡的人数位居妇科肿瘤首位。手术治疗是乳腺癌临床治疗的首选方案。放疗和化疗是乳腺癌治疗的辅助手段,然而由于肿瘤放化疗都会产生明显的毒副作用,肿瘤化疗具有较强的全身毒性,因此迫切需要探索新的治疗手段。整合素受体是在肿瘤细胞表面高度表达的一种受体,常见于乳腺癌,胶质瘤以及肝癌和黑色素瘤等肿瘤细胞表面,而在其他正常细胞表面却较少表达,因此整合素受体成为了肿瘤靶向治疗的研究热点。有研究显示RGD是整合素受体的特异性配体,RGD肽对整合素受体具有高效选择性。八聚精氨酸R8是由8个精氨酸分子呈链状连接成的细胞穿膜肽,它能够高效穿透与之接触的细胞膜,进入细胞内部,不具有选择性。本课题以临床上常用的肿瘤化疗药物阿霉素为模型药物,制备了R8-RGD修饰的阿霉素脂质体。通过共价结合的方式,将R8-RGD连接于脂质体表面,制备了R8-RGD修饰的载阿霉素脂质体。本文的第一部分为MCF-7细胞的培养及实验分组。将实验室保存的MCF-7细胞经过复苏,传代培养,冻存等步骤进行培养并分组,将MCF-7细胞随机分为PBS组、普通阿霉素脂质体组、RGD修饰的阿霉素脂质体组、R8修饰的阿霉素脂质体组和RGD-R8修饰的阿霉素脂质体组。本文第二部分将制备不同的阿霉素脂质体,对其理化性质进行考察,并在细胞水平对其进行评价。首先是考察RGD-R8修饰的阿霉素脂质体表征。结果显示,制备得到的RGD-R8修饰的阿霉素脂质体呈球形,粒径较为均一。由于阿霉素本身具有红色荧光。我们以阿霉素为探针检测了乳腺癌MCF-7细胞对于脂质体的摄取能力,结果显示,乳腺癌MCF-7细胞对RGD-R8修饰的阿霉素脂质体的摄取效率显著强于其他脂质体组,差异有统计学意义(P<0.01)。我们进一步考察了RGD-R8修饰的阿霉素脂质体被MCF-7细胞摄取的机制。结果显示:MCF-7细胞对RGD-R8修饰的阿霉素脂质体的摄取是一个温度、能量和电荷依赖的由网格蛋白介导的摄取过程。我们将载药后的脂质体进行细胞毒性实验,实验结果表明,在给药量相同的情况下,RGD-R8修饰的阿霉素脂质体对肿瘤细胞的抑制作用显著强于其他脂质体,这与细胞摄取结果相同。综上所述,本研究成功制备了RGD-R8修饰的阿霉素脂质体,该系统具备一定的乳腺癌细胞靶向性和乳腺癌细胞生长抑制能力,是一种具有潜力的传递抗肿瘤药物治疗乳腺癌的药物传递系统。