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研究目的:通过观察SNAI1在小鼠植入前胚中表达及SNAI1特异性抗体培养的结果,为阐明转录因子SNAI1在小鼠植入前胚合子基因组激活中的作用和机制提供理论依据。基本研究内容:1.观察SNAI1在小鼠1-细胞胚和2-细胞胚中的阶段性表达情况。2.观察SNAI1特异性抗体培养对小鼠植入前胚体外发育、合子型基因组激活(Zygotic genome activation,ZGA)、2-细胞胚DNA复制、2-细胞胚G1/S期过渡相关因子的影响。研究方法:1.SNAI1在小鼠1-细胞胚和2-细胞胚中的阶段性表达:于hCG注射后18h~55h每隔一段时间收集KM小鼠不同细胞周期的1-细胞胚和2-细胞胚,利用细胞免疫荧光染色检测SNAI1蛋白的表达情况;2.SNAI1特异性抗体对小鼠植入前胚体外发育的影响:收集KM小鼠1-细胞胚,分别置于KSOM培养液,含不同浓度SNAI1特异性抗体、兔IgG的KSOM培养液中培养,观察小鼠植入前胚体外发育情况;3.SNAI1特异性抗体对小鼠ZGA的影响:收集KM小鼠1-细胞胚,分别置于含兔IgG(1μg/ml)和SNAI1特异性抗体(1μg/ml)的KSOM培养液中培养。于hCG后45h收集2-细胞胚进行检测:(1)运用Realtime-PCR技术检测MuERV-L、eIF1A、Zscan4d、Hsp70.1的mRNA表达水平;(2)采用细胞免疫荧光染色检测eIF1A和Zscan4蛋白的表达情况;4.SNAI1特异性抗体对小鼠2-细胞胚DNA复制及G1/S期过渡相关因子表达的影响:收集KM小鼠1-细胞胚,分别置于含兔IgG(1μg/ml)和SNAI1特异性抗体(1μg/ml)的KSOM培养液中培养。于hCG后36h~42h收集小鼠2-细胞胚,采用BrdU摻入法观察S期DNA复制情况。同法收集小鼠1-细胞胚和2-细胞胚,通过细胞免疫荧光染色检测CyclinD1、CyclinE、Nanog蛋白表达情况。研究结果:1.SNAI1蛋白在小鼠2-细胞胚S期和G2期核内出现明显表达:小鼠1-细胞胚各时期和2-细胞胚G1期,SNAI1蛋白均匀分布于整个细胞;2-细胞胚的S期和G2期核内出现明显表达;有丝分裂期重新分布于整个细胞。2.SNAI1特异性抗体导致小鼠2-细胞胚发育阻滞:与KSOM组相比,1.0μg/ml兔IgG组和0.1μg/ml SNAI1抗体对小鼠植入前胚各阶段发育无显著影响;0.5μg/ml SNAI1抗体可导致4-细胞胚及桑葚胚发育率下降(P<0.05);1.0μg/ml SNAI1抗体使2-细胞胚发育停滞(P<0.001)。3.SNAI1特异性抗体导致eIF1A表达水平改变:与兔IgG组相比,SNAI1抗体组(1μg/ml)2-细胞胚eIF1A mRNA表达水平显著升高(P<0.05),而MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1mRNA的表达无显著改变(P>0.05)。免疫荧光结果显示,SNAI1抗体组细胞核内eIF1A荧光强度高于兔IgG组(P<0.05)。4.SNAI1特异性抗体可影响小鼠2-细胞胚DNA复制,对2-细胞胚G1/S期过渡相关因子表达无明显影响:兔IgG(1.0μg/ml)组BrdU掺入率为85.7%,SNAI1特异性抗体组(1.0μg/ml)BrdU掺入率为15.0%,差异显著(P<0.001)。与兔IgG组相比,SNAI1抗体对G1/S过渡相关因子CyclinD1、CyclinE、Nanog没有明显影响(P>0.05)。结论:1.SNAI1蛋白在2-细胞胚核内出现时间与ZGA发生时间相关,且SNAI1抗体使eIF1A表达上调,提示其参与小鼠合子基因组激活。2.SNAI1可能通过调控小鼠2-细胞胚S期的进程来影响ZGA。