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目的运用转染慢病毒介导的si RNA干扰的方法,抑制伯基特淋巴瘤Raji细胞中PARP-1基因的表达,研究其对肿瘤细胞增殖与凋亡的影响,探讨PARP-1基因在淋巴瘤中的作用机制,为恶性淋巴瘤的靶向治疗提供理论和实验依据。方法(1)细胞培养:将人伯基特淋巴瘤Raji细胞株培养于含1%青霉素和1%链霉素、15%的胎牛血清的RPMI1640培养液中,并置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,以及后续的细胞传代、换液、冻存、复苏。采用细胞活力数>90%、对数生长期的细胞用于本实验。(2)分组:将细胞随机分为三组:空白对照组;阴性对照组(NC-si RNA):转染PARP-1小干扰RNA阴性对照序列的细胞;实验组:转染PARP-1小干扰RNA的细胞。(3)转染慢病毒介导的si RNA抑制PARP-1基因在淋巴瘤细胞中的表达。(4)运用实时荧光定量PCR的方法分别对空白对照组、阴性对照组和实验组细胞中PARP-1 m RNA的表达情况进行检测,并计算出其抑制效率。(5)运用CCK-8的方法分别于12h、24h、36h、48h检测三组细胞的增殖活性。(6)运用流式细胞术分别于细胞培养12h、24h、36h、48h后检测三组细胞的凋亡率。结果(1)荧光显微镜下见到绿色荧光视为转染成功,转染后我们于24h、48h、72h分别进行荧光计数,比较绿色荧光细胞的数量,随着时间的延长,绿色荧光的表达量逐渐增高,于72h绿色荧光的表达量最高,NC-si RNA组、PARP-1—si RNA组Raji细胞的转染效率达80%以上,用来进行后续实验的研究。(2)运用实时荧光定量PCR的方法检测三组细胞中si RNA对PARP-1 m RNA的表达水平。以对照组细胞中PARP-1基因的m RNA表达水平为100%,NC-si RNA组和实验组细胞中PARP-1基因m RNA表达水平分别为(94.8±0.5)%、(54.6±0.3)%。与未转染的空白对照组相比,转染无关序列的NC组对PARP-1 m RNA的表达无影响,差异无统计学意义(P>0.05),而实验组PARP-1 m RNA的表达明显受抑制,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(3)CCK-8法检测细胞增殖活性,结果显示,随着时间的延长,细胞增殖活性抑制率逐渐升高,在48h时,三组细胞增殖活性抑制率分别为(22±0.4)%、(24±0.2)%、(58±0.7)%,对照组与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),而实验组Raji细胞的增殖活性明显受抑制,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)运用流式细胞术检测细胞凋亡率,结果显示,随着时间的延长,凋亡率逐渐增加,于48h时细胞凋亡率增高,实验组细胞凋亡率达到(37±0.4)%,而空白对照组、阴性对照组细胞凋亡率分别为(11.4±0.3)%、(13.8±0.3)%,实验组与对照组相比,差异具有显著统计学意义(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论抑制PARP-1基因在淋巴瘤Raji细胞中的表达,可抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡。其作用机制较为复杂,可能为不仅通过调控转录因子对恶性肿瘤的增殖产生抑制作用,而且通过激活“死亡底物”—Caspase促进其凋亡,起到促进细胞凋亡的作用,该方法可以提高治疗肿瘤细胞的针对性和敏感性,为恶性淋巴瘤的靶向治疗提供理论和实验依据。