论文部分内容阅读
SNJ2是嗜盐古生菌Natrinema sp.J7-1中一株温和性包膜病毒,属于多形性病毒科,Betapleolipovirus属,SNJ2病毒基因组编码25个预测ORFs,基因组大小16992 bp。SNJ2的前病毒整合在宿主基因组tRNAMet基因3’末端,整合位点为14 bp的正向重复序列,其自身编码的位点特异性重组系统既可介导进入裂解循环时前病毒从染色体上的切离和环化,也可使感染宿主细胞的环状病毒基因组重新整合到宿主染色体上,形成溶源化状态。SNJ2以何种方式进行复制尚不清楚,本论文以此为基础探索SNJ2基因组在宿主细胞内的复制机制。首先,构建了含有SNJ2基因组全长的E.coli-Natrinema sp.J7-1穿梭载体pFSNJ2。我们将pFSNJ2嗜盐转化至J7-3-F菌株后,从传第三代的J7-3-F/pFSNJ2菌株中提取质粒转化至大肠杆菌,多次重复仅挑取到一个转化子。提取该转化子的质粒,酶切后的片段大小相较于酶切初始构建的pFSNJ2有所缩短,说明pFSNJ2即使能在J7-3-F中以游离形式复制,也并不稳定。进一步检测pFSNJ2在J7-3-F中的存在形式,发现在J7-3-F/pFSNJ2传代的培养物中检测到重组产物接头attBOP,说明pFSNJ2整合至宿主染色体上,用MMC对该菌株进行诱导,在上清液和细胞沉淀中未检测到病毒从宿主基因组切离后形成的环化接头attP’OP,推测整合在宿主染色体上的pFSNJ2影响了切离反应,也可能pFSNJ2不能以质粒形式进行复制。实验室前期工作已证实SNJ2上orf1编码的整合酶是负责前病毒特异性切离、整合的关键因子。因此,我们利用整合酶的特性探索SNJ2是否能游离于宿主染色体外进行复制。在缺陷型菌株J7-1-FΔorf1::pyrF中导入单独表达orf1的质粒后进行MMC诱导,收获缺陷型病毒SNJ2Δorf1::pyrF侵染J7-3-F。和预期一样,检测不到attBOP和attP’OP,这是因为该缺陷病毒没有整合酶编码基因,因此无法整合到染色体上,但我们始终未能挑取到稳定携带SNJ2Δorf1::pyrF的宿主菌株,说明该缺陷病毒的游离基因组在宿主细胞中非常不稳定,传代易丢失,极有可能不能以游离形式完成自我复制。作为对照,用SNJ2Δorf1::pyrF侵染整合酶回补株J7-3-F/pYCJ-2300,在侵染株中能检测到attBOP和attP’OP,说明在J7-3-F内表达整合酶后,SNJ2Δorf1::pyrF可以整合至宿主染色体上,也可以从宿主染色体上切离。综合以上结果表明缺陷型病毒SNJ2Δorf1::pyrF可以吸附并注入宿主J7-3-F中,但其因缺乏整合酶不能整合至宿主基因组上,SNJ2Δorf1::pyrF传代中易丢失,推测其不能以游离形式完成自我复制,暗示SNJ2基因组通过整合至宿主染色体上才能复制。已知正常生长的J7-1中,SNJ2以较低程度复制释放病毒颗粒,经MMC处理后,SNJ2进入裂解循环可大量复制释放病毒颗粒。为了解J7-1经MMC诱导后SNJ2在细胞内大量复制的时间,我们通过Q-PCR对J7-1经MMC诱导前后每个细胞内SNJ2的拷贝数进行了测定。结果显示,J7-1在未诱导时,SNJ2基因组主要以整合状态存在,MMC诱导后,细胞内游离的SNJ2基因组在4 h开始大量增加,推测SNJ2基因组大量复制的时间是J7-1经诱导后4 h,J7-1经MMC诱导后8 h,attBOP
其他文献
电流互感器是电力系统最普遍、最基本的测量设备之一,其可靠性对电力系统安全稳定运行有着重要的作用。在某供电局,LR-220型环形铁心电流互感器被大量使用在220 kV气体绝缘开关设备线路侧,该型号电流互感器在正常工作时发出的声响十分剧烈,严重恶化了变电站的工作环境。本文以该型号电流互感器为研究对象,针对该环形铁心电流互感器的振动噪声问题开展了仿真研究与实验研究。本文在磁畴理论与J-A模型的基础上,忽
高维数据的研究是统计理论与应用研究的热点。在高维数据情形下,也就是变量的维度大于或远大于样本量时,会产生所谓的“维数祸根”。此时,数据是稀疏的且变量间存在伪相关。
多孔金属材料是一种近年来发展迅速的新型材料又称泡沫金属材料,由于其多孔洞的特性及优良的多种性能,在诸方面都展现了良好的应用前景,是当下力学与材料学众多学者的研究热点。但由于材料多孔洞的特性,其承载能力较弱,在单独使用下应用范围受到了较大限制,近年来出现了许多关于多孔金属与其他材料的复合形式,即多孔金属通过与其他材料复合形成新型的材料。目前已有众多复合形式,大致可以分为多孔金属三明治结构和多孔金属空
语言的习得和所处的环境密切相关,外语的学习更离不开交际的语言环境。在日常生活中,听力是一项人际交往中占据最主要地位的语言技能,听力不是被动的接收信息,而是听者积极、主动地对输入语流进行加工、解码的过程。在英语学习中,听力不仅仅是一项必备技能,而且是一个用来衡量学习者综合语言能力的重要指标。因此,要想提高听力能力,策略的培训是必不可少的。听力策略是学习策略不可或缺的一部分,已经受到了很多国内外学者的
在国民经济发展和运行过程中,小企业是不可忽视的力量,在稳定就业、增加税收、科技创新、对外贸易中发挥重要作用。但是由于小企业自身和外部环境的因素影响,长期面临融资困难的问题。为此,国家出台了大量针对小企业发展的扶持政策,尤其是加大银行信贷支持的政策受到小企业的欢迎。但是从银行角度,小企业贷款风险管控难度相对较大,银行对小企业贷款业务的推进积极性不高。因此,研究XYFZ分行对小企业信贷风险管控问题,不
随着我国污水处理厂的增加,污泥的产量也逐年增加,如果不经过适当处理会对环境造成二次污染,因此必须对其首先进行减量化处理。预处理措施可改善污泥的脱水特性,从而使之达到最优的减量化效果。超声波及微细气泡技术具有效率高、环境友好等特点,已经受到越来越多的国内外学者的关注。通过超声波预处理方式对市政污泥的脱水特性进行研究,测定了不同条件下超声波氧化性的变化。超声波单独作用时,对提高脱水特性较为有利的条件是
近年来,2μm以上的中红外拉曼光纤激光器在军事国防、生物医疗、红外传感、物种识别、污染物监测以及激光通信等领域拥有重要应用前景,成为拉曼光纤激光器发展的一个重要方向
随着社会结构变化和进步,越来越多的女性参与到社会活动中,在组织中男性一枝独秀的情况已经发生了转变,更多的女性担任起重要的职务,并拥有更多的话语权,对推动经济和社会的
量子控制与许多新兴领域如原子物质、分子化学和量子信息科学紧密相关,目前已经成为发展量子技术的基础任务之一。研究人员陆续研究出一些适用于量子系统的控制手段,如量子最