TSG-6通过调控Fas/FasL信号通路影响人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡机制的实验研究

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背景肿瘤坏死因子α刺激基因-6(tumor necrosis factorαstimulated gene6,TSG-6)已被证实是一种具有抗炎作用的基因,其高表达于多种炎症反应或者类似炎症的过程。我们最近的研究也表明TSG-6蛋白具有抗炎和抑制瘢痕形成的作用,但TSG-6蛋白参与瘢痕形成的机制尚不明确。目的探究TSG-6是否通过Fas/FasL信号通路影响人增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡及其机制。方法采用胶原酶消化法分离纯化得到人增生性瘢痕成纤维(hypertrophic scar fibroblasts,HSF)细胞,构建p LVX-Puro-TSG-6重组慢病毒载体,感染HSF细胞,并行q PCR和Western Blot检验各组细胞中TSG-6的表达。用流式细胞术检测转染后各组细胞凋亡情况,MTT法检测转染后各组细胞增殖情况。用q PCR和Western Blot的方法检测Fas/FasL信号通路中凋亡相关基因的m RNA和蛋白的表达变化。结果与结论成功地培养了原代人增生性瘢痕成纤维细胞,并成功地构建了重组慢病毒载体且稳定地转染了HSF,从而导致实验组即TSG-6过表达组(p LVX-Puro-TSG-6组)细胞中TSG-6的表达上调。与对照组即TSG-6过表达对照组(p LVX-Puro组)和HSF对照组(untransfected HSF组)相比,实验组(p LVX-Puro-TSG-6组)细胞凋亡率显著上升(P<0.05),而细胞增殖则明显减少(P<0.05)。q PCR和Western Blot结果显示:转染TSG-6表达载体的HSF细胞,其Fas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-3基因m RNA水平和对应蛋白表达量显著升高(P<0.05);HSF对照组、TSG-6过表达对照组组间差异无统计学意义。TSG-6可能通过激活Fas/FasL信号通路,促进人增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡、抑制其增殖,从而抑制增生性瘢痕的增生。
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