长链非编码RNA HOTAIR在肾透明细胞癌中的表达及对肾癌细胞的影响

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目的:为了探索长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR mRNA)与肾透明细胞癌发生、发展的关系,我们检测了非编码RNA HOTAIR在肾透明细胞癌组织与癌旁正常肾组织间的表达差异,并进一步探讨其与肾透明细胞癌各临床分期、病理分级之间的关系。通过构建shRNA载体,研究干涉沉默非编码RNAHOTAIR对肾透明细胞癌细胞786-0的生长、凋亡、侵袭迁移等生物学行为的影响,为肾癌的诊断和治疗提供新的方法和思路。方法:收集2013年08月至2014年04月间在南昌大学第一附属医院泌尿外科行后腹腔镜肾癌根治性切除术治疗并术后病理确诊为肾透明细胞癌的20例肾癌组织和相应的癌旁正常肾脏组织(术前未放疗或化疗)。选用TRIZOL法提取肾透明细胞癌组织、配对癌旁正常肾组织的总RNA,定量后进行逆转录,利用实时荧光定量PCR技术检测肾透明细胞癌和配对癌旁正常肾组织中HOTAIR的表达情况,并结合临床分期和病理分级,进行统计学分析。采用基因功能丧失的方法,构建shRNA载体,研究沉默非编码RNA HOTAIR对肾透明细胞癌细胞786-0生长的影响:CCK-8检测细胞的增殖,transwell实验检测细胞侵袭,Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡。结果:1、肾透明细胞癌中HOTAIR的相对表达量为12.36±1.61,配对癌旁正常肾组织中的表达量为3.01±0.45,非编码RNA HOTAIR在肾透明细胞癌中的表达明显高于配对癌旁正常肾组织(P<0.05)。2、肾透明细胞癌非编码RNA HOTAIR的表达水平从高分化组到低分化组和临床I期到临床III期均明显升高,,各组之间存在显著差异(P<0.05),提示HOTAIR在肾透明细胞癌中的高表达与肿瘤趋向于恶性有关。非编码RNAHOTAIR的表达水平在年龄、性别无统计学差异(P>0.05)。3、干涉沉默非编码RNA HOTAIR后,肾透明细胞癌细胞786-0的细胞增殖明显降低,细胞侵袭能力明显下降,细胞凋亡明显增加。结论:1、在肾透明细胞癌组织中,HOTAIR的表达显著上调,提示非编码RNAHOTAIR可能与肾透明细胞癌的发生、发展相关,HOTAIR的表达水平检测可能有助于肾透明细胞癌的诊断。2、HOTAIR的表达水平与肾透明细胞癌的临床分期呈正相关,或许可以作为诊断肾透明细胞癌或判断肾透明细胞癌患者预后的新指标。3、通过体外细胞实验发现干涉沉默肾透明细胞癌细胞786-0非编码RNAHOTAIR的表达,能够有效的抑制肾透明癌细胞786-0的增殖,降低其侵袭能力,促进癌细胞的凋亡。4、非编码RNA HOTAIR在肾透明细胞癌中可能发挥着促癌基因的作用,下调其表达,可能成为一种治疗肾透明细胞癌的新手段。
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