【摘 要】
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花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料作物和经济作物,但由于花生遗传基础狭窄、抗逆性差,易感多种病虫害,尤其是褐斑病、黑斑病、网斑病等真菌性病害,严重影响其产量和质量。
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花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料作物和经济作物,但由于花生遗传基础狭窄、抗逆性差,易感多种病虫害,尤其是褐斑病、黑斑病、网斑病等真菌性病害,严重影响其产量和质量。本研究以广谱抗真菌性的β-1,3-葡聚糖酶基因为目的基因进行了花生遗传转化。首先以花生幼叶为外植体进行培养,建立了花生幼叶高频再生体系;然后以此体系为培养基础对农杆菌介导的花生遗传转化影响因素进行了研究,并将β-1,3-葡聚糖酶基因转入花生,获得了转基因植株,结果如下:
1.用花生品种花育22和花育23作材料,将种子萌发5-7 d的幼叶切块培养在添加NAA和BAP的MSB<,5>培养基上诱导不定芽的形成,结果表明MSB5+1 mg/L NAA+6.0mg/L BAP培养基最有利于不定芽的诱导,花育22和花育23不定芽诱导率分别达到94%和90%。将形成不定芽的愈伤组织转移到添加BAP的MSB<,5>培养基上促使芽伸长进一步长成小苗,结果表明MSBs+4.0 mg/L BAP的培养基最为有效,花育22和花育23植株诱导率分别达到89.6%和91.8%。将再生小植株从基部切下转至生根培养基上,使其生根长成完整植株。在MSB<,5>+0.5 mg/L NAA培养基上生根效果较好。
2.利用花育22和花育23幼叶为受体材料,对农杆菌介导的花生遗传转化条件进行了研究。农杆菌选用LBA4404和EHA105,质粒为表达载体pATC940含有β-1,3-葡聚糖酶基因和Km抗性基因。确立的转化条件为:Km筛选压为50mg/L,预培养时间为2d,菌液侵染浓度OD<,600>=0.5,外植体侵染时间为10-15min,共培养时间为3 d。
3.将Km抗性再生植株经PCR检测扩增出了与目的基因片段大小相同的条带,证明获得了β-1,3-葡聚糖酶基因的花生转化植株。
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