农杆菌介导花生遗传转化条件的研究

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mjbetty
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料作物和经济作物,但由于花生遗传基础狭窄、抗逆性差,易感多种病虫害,尤其是褐斑病、黑斑病、网斑病等真菌性病害,严重影响其产量和质量。本研究以广谱抗真菌性的β-1,3-葡聚糖酶基因为目的基因进行了花生遗传转化。首先以花生幼叶为外植体进行培养,建立了花生幼叶高频再生体系;然后以此体系为培养基础对农杆菌介导的花生遗传转化影响因素进行了研究,并将β-1,3-葡聚糖酶基因转入花生,获得了转基因植株,结果如下: 1.用花生品种花育22和花育23作材料,将种子萌发5-7 d的幼叶切块培养在添加NAA和BAP的MSB<,5>培养基上诱导不定芽的形成,结果表明MSB5+1 mg/L NAA+6.0mg/L BAP培养基最有利于不定芽的诱导,花育22和花育23不定芽诱导率分别达到94%和90%。将形成不定芽的愈伤组织转移到添加BAP的MSB<,5>培养基上促使芽伸长进一步长成小苗,结果表明MSBs+4.0 mg/L BAP的培养基最为有效,花育22和花育23植株诱导率分别达到89.6%和91.8%。将再生小植株从基部切下转至生根培养基上,使其生根长成完整植株。在MSB<,5>+0.5 mg/L NAA培养基上生根效果较好。 2.利用花育22和花育23幼叶为受体材料,对农杆菌介导的花生遗传转化条件进行了研究。农杆菌选用LBA4404和EHA105,质粒为表达载体pATC940含有β-1,3-葡聚糖酶基因和Km抗性基因。确立的转化条件为:Km筛选压为50mg/L,预培养时间为2d,菌液侵染浓度OD<,600>=0.5,外植体侵染时间为10-15min,共培养时间为3 d。 3.将Km抗性再生植株经PCR检测扩增出了与目的基因片段大小相同的条带,证明获得了β-1,3-葡聚糖酶基因的花生转化植株。
其他文献
玉米是主要的粮食、饲料作物和工业原料,在世界和我国农业生产上均具有重要的作用。我国在玉米的传统育种方面已经取得了长足的进步。随着植物分子生物学技术的发展,该技术在提高玉米的产量和品质等方面发挥着重要的作用。酵母双杂交系统使该技术的应用更加便捷。应用酵母双杂交系统可以很方便的研究蛋白质与蛋白质,蛋白质与RNA,蛋白质与小分子等的相互作用。而获得高质量的cDNA文库则是能否筛选到与其相互作用蛋白的前提
AIM: To construct PGEX-1λT-FALL-39 expression vector and its mutant vector, and study the relationship of function and structure. METHODS: A cDNA encoding matu
普通六倍体小麦含有3种Wx蛋白亚基Wx-A1、Wx-B1和Wx-D1,当3个亚基全部缺失时,小麦胚乳中直链淀粉含量几乎为0,称为全糯小麦。糯性小麦具有支链淀粉含量高、糊化温度低、高峰粘度高和膨胀势高等特点,在食品和工业中具有广泛用途。黑粒小麦的蛋白质含量、必需氨基酸含量、微量元素含量、膳食纤维含量都比白粒小麦高。Vc含量以及类胡萝卜素含量也高于白粒小麦,而可溶性糖则低于白粒小麦,黑粒小麦食品的营养
AIM: To explore whether the differential effects of Zn2+ on ryanodine binding to the sarcoplasmic reticulum (SR)of skeletal and cardiac muscles resulted from di
本研究通过基因工程手段, 利用农杆菌介导法将Bt基因导入马铃薯品种大西洋, 同时对马铃薯品种大西洋、地西瑞、东农303和克新4号的茎段和叶片再生体系进行优化,建立了马铃薯高效再生体系和遗传转化体系, 探讨了影响植株再生频率和遗传转化效率的因素, 确立了最佳植株再生体系和遗传转化条件,获得了转基因植株。主要研究结果如下:1马铃薯再生体系的建立⑴ 茎段最佳愈伤培养基为:MS+0.1 mg/l 2,4-
AIM: To investigate effects of thenorphine, a new compound of partial agonist of μ-opioid receptor, on the locomotor activity and the behavioral sensitization
AIM: To investigate the regulatory effect of paclitaxel on proliferation and apoptosis in human acute leukemia HL60 cells. METHODS: HL-60 cell growth was measur
我国是世界上可再生能源原料产出量最大的国家,每年产生农作物秸秆7.0亿t,黑龙江是我国粮食安全的重要战略基地,对保障我国粮食安全具有极其重要的作用。针对黑龙江秸秆还田后的化感效应问题,国家开展了相关课题的研究。在中国北方地区,小麦-玉米两熟种植制度下,大量玉米秸秆连年己显著影响了小麦生长发育及土壤生态系统,在黑龙江省农田生态系统中,玉米秸秆还田后长期连作是否存在自毒效应尚不清楚,且未有相关研究报道
干旱胁迫是影响作物生长、发育的重要限制因子,研究水稻的抗旱性,对节水农业具有重要理论和现实意义。本研究以旱稻品种IRAT109干旱处理幼苗和抗旱大棚内的成株期植株为材料,制作Affymetrix表达谱芯片。选取了芯片结果中上升表达强度第二的基因(OSI2),对其进行了克隆和功能的初步研究。本实验也做了Picloram对水稻愈伤组织生长的影响研究。其结果如下:1.通过RT-PCR和RACE技术相结合
AIM: To understand pharmacophore properties of styrylquinoline derivatives and to design inhibitors of HIV-1integrase. METHODS: Comparative molecular field anal