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本文从以下几个方面进行论述:
第一部分 对比苗医与中医理论在肿瘤治疗中的异同
现今民族医药事业呈现日新月异的发展,而苗族医药作为其中的一份子,因其独特的思维方法、疾病理念,以及特色的药物资源,也越来越受到重视。但对苗医与肿瘤相关理论的研究,及其与中医理论对比有何异同的报道也相对较少。
本着苗医简、便、廉、效的特点,本课题组通过对文献的分析整理发现,苗医与肿瘤相关理论有生成学说、三本论及架组理论,而苗医架组理论与中医藏象学说、苗医三界学说与中医三焦理论、苗医筋脉学说与中医经络学说等均有一定的相似之处。苗医在对肿瘤的内治法、外治法及心理疗法上也与中医理论有一定的交集,同时也存在其独具特色的思维方式。因而,苗医相关理论知识在肿瘤的治疗应用中具有一定的学术意义,这些也都是祖辈们在不断实践中所提炼出来的宝贵财富。
本研究内容主要分为四点,前言主要介绍了本部分的研究背景、研究意义以及研究方法;第一章通过介绍苗医发展背景,以及梳理与肿瘤相关的苗医理论;第二章主要对比论述苗医与中医理论在肿瘤治疗中的异同;小结部分总结苗医与中医理论在肿瘤治疗中的异同,发现两种理论具有一定的互通性。同时本文仍存在许多不足之处,有待进一步改进。
第二部分 蟾灵膏通过IL-6/STAT3信号通路干预结直肠癌肝转移微环境的作用机制
目的:通过建立结直肠癌CT26细胞BALB/c小鼠肝移植瘤模型,探讨蟾灵膏对肝转移微环境的作用,并以IL-6/STAT3信号通路及其相关因子HIF-1α、VEGF、Snail、E-cadherin为切入点,明确其对结直肠癌肝转移微环境的作用机制,从而为结直肠癌肝转移的中医药防治寻求新的药物和途径。
方法:建立结直肠癌CT26细胞肝转移模型,造模完成2周后,随机将60只小鼠分为:模型组(Model)、卡培他滨组(Capecitabine组)、蟾灵膏高剂量组(Chanling Gao high, CLGH)、蟾灵膏中剂量组(Chanling Gao middle, CLGM)、蟾灵膏低剂量组(Chanling Gao low, CLGL),每组12只:同时,选取12只与造模小鼠同样条件的小鼠作为正常组(Normal)。Normal、Model组给予0.2 ml生理盐水灌胃,每日一次: Capecitabine组给予0.359 g/kg的水溶液0.2 ml灌胃,每日一次,在给药5d后,停药2d,以此作为1疗程: CLGH组给子6.06 g/kg的水溶液0.2ml灌胃,每日一次: CLGM组给予3.03 g/kg的水溶液0.2 ml灌胃,每日一次: CLGL组给予1.52 g/kg的水溶液0.2ml灌胃,每日一次。均连续给药2周。一般指标观察:①每天观察并记录小鼠的一般情况,隔2天用电子称测量一次体质量;②给药结束后,次日用眼球取血法取得小鼠全血,脱颈法处死小鼠,用组织剪暴露腹腔,完整摘除小鼠肝脏,观察肝脏转移瘤情况,对肝脏转移灶数目进行计数,作好记录。并及时称取肝脏重量,计算肝脏指数。病理组织学指标:①HE染色观察小鼠肝脏转移瘤微观结构;②ELISA法检测小鼠血清中IL-6、VEGF的表达水平:③免疫组织化学法检测小鼠肝脏转移瘤中HIF-1α、VEGF、E-cadherin蛋白的阳性表达:④Western blot法检测肝脏转移瘤中IL-6、STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF和Snail的蛋白表达。
结果:一般指标:①Normal组小鼠体重呈逐渐增长趋势,但Model、Capecitabine、CLGH、CLGM、CLGL组小鼠因造模腹部多发转移瘤的原因,使得腹部均出现大小不一的膨出的肿块,导致小鼠体重增长趋势显著。②肝重及肝脏指数方面,与Normal组相比, Model组小鼠的肝重和肝脏指数明显增加(P<0.05):与Model组相比,Capeciabine、 CLGH、CLGM组小鼠肝重和肝脏指数减轻(P<0.05);与CLGL组相比,CLGH、 CLGM组肝重和肝脏指数减轻(P<0.05)。③肝转移瘤方面,在接种CT26细胞后,各组肝脏表面均布有大小不等的结节,其中Model、CLGL组肝脏结节较多; Capecitabine. CLGH、 CLGM组小鼠肝脏结界相对分布较少。与Model组相比,Capecitabine、 CLGH、CLGM组小鼠肝脏转移瘤明显减少(P<0.05);与CLGL组相比,CLGH、 CLGM组小鼠肝脏转移瘤也有所减少(P<0.05)。病理组织学指标:①HE结果发现,Normal组小鼠肝组织结构完整,细胞大小基本-致,细胞核边缘清晰,细胞质均匀,肝索排列规则,肝小叶结构清晰: Model组小鼠肝组织肝索排列紊乱,肝细胞呈不规则密集排列,可见细胞质缩小,细胞核增大,核质比例增大,出现不对称性、多极性核分裂,异型性明显: Capecitabine、 CLGH组小鼠肝组织肝索摆列尚规则,肝小叶:布局尚存,仍可见异型增生的细胞; CLGM组肝索摆列稍乱,可见大细胞及小细胞性异型增生,但较Model组明显减少; CLGL组肝索摆列较乱,明显可见大细胞,及小细胞性异型增生,核染色质致密。②ELISA结果提示,与Normal组比较,Model组小鼠血清中的IL-6、VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与Model组比较,Capeciabine、 CLGH、 CLHM组小鼠血清中的IL-6、VEGF蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与CLGL组相比,CLGH、 CLGM组小鼠血清中IL-6. VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05)。③免疫组织化学法检测结果提示,VEGF蛋白在Model组呈强阳性表达(+++),在Capecitabine组呈弱阳性表达(+),在CLGH组呈弱阳性表达(+),在CLGM组星阳性表达(++),在CLGL组呈强阳性表达(+++); HIF-1α蛋白在Model组呈强阳性表达(+++),在Capcitabine组呈弱阳性表达(+),在CLGH组呈弱阳性表达(+),在CLGM组呈阳性表达(++),在CLGL组呈强阳性表达(+++); E-cadherin蛋白在Model组呈弱阳性表达(+),在Capeciabine组呈强阳性表达(+++),在CLGH组呈强阳性表达(+++),在CLGM组呈阳性表达(++),在CLGL组呈呈弱阳性表达(+)。④Westem blot检测结果显示,与Normal组相比,Model组小鼠肝脏中IL-6、VEGF、 HIF-1α、 Snail、 p-STAT3蛋白的表达水平明显升高(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异:与Model组相比,Capecitabine、CLGH、CLGM组小鼠肝脏中IL-6、VEGF、HIF-1α、Snail、 p-STAT3蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异:与CLGL组相比,CLGH、CLGM组小鼠肝脏中IL-6、VEGF、HIF-1α、Snail、 p-STAT3蛋白的表达水平降低(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异。
结论:(1)蟾灵膏具有改善CT26细胞建立的结直肠癌肝转移BALB/c小鼠模型肝重及肝脏指数,起到保护肝脏作用,并抑制肝脏转移瘤的生长。(2)蟾灵膏可以下调CT26细胞建立的结直肠癌肝转移BALB/c小鼠模型血清中IL-6、VEGF的蛋白表达水平以及小鼠肝脏微环境IL-6、p-STAT3、 HIF-1α、VEGF、Snail蛋白表达水平,上调E-cadherin的蛋白表达水平,从而起到抑制肝脏微环境新生血管的生成及上皮间质转化的过程。
第一部分 对比苗医与中医理论在肿瘤治疗中的异同
现今民族医药事业呈现日新月异的发展,而苗族医药作为其中的一份子,因其独特的思维方法、疾病理念,以及特色的药物资源,也越来越受到重视。但对苗医与肿瘤相关理论的研究,及其与中医理论对比有何异同的报道也相对较少。
本着苗医简、便、廉、效的特点,本课题组通过对文献的分析整理发现,苗医与肿瘤相关理论有生成学说、三本论及架组理论,而苗医架组理论与中医藏象学说、苗医三界学说与中医三焦理论、苗医筋脉学说与中医经络学说等均有一定的相似之处。苗医在对肿瘤的内治法、外治法及心理疗法上也与中医理论有一定的交集,同时也存在其独具特色的思维方式。因而,苗医相关理论知识在肿瘤的治疗应用中具有一定的学术意义,这些也都是祖辈们在不断实践中所提炼出来的宝贵财富。
本研究内容主要分为四点,前言主要介绍了本部分的研究背景、研究意义以及研究方法;第一章通过介绍苗医发展背景,以及梳理与肿瘤相关的苗医理论;第二章主要对比论述苗医与中医理论在肿瘤治疗中的异同;小结部分总结苗医与中医理论在肿瘤治疗中的异同,发现两种理论具有一定的互通性。同时本文仍存在许多不足之处,有待进一步改进。
第二部分 蟾灵膏通过IL-6/STAT3信号通路干预结直肠癌肝转移微环境的作用机制
目的:通过建立结直肠癌CT26细胞BALB/c小鼠肝移植瘤模型,探讨蟾灵膏对肝转移微环境的作用,并以IL-6/STAT3信号通路及其相关因子HIF-1α、VEGF、Snail、E-cadherin为切入点,明确其对结直肠癌肝转移微环境的作用机制,从而为结直肠癌肝转移的中医药防治寻求新的药物和途径。
方法:建立结直肠癌CT26细胞肝转移模型,造模完成2周后,随机将60只小鼠分为:模型组(Model)、卡培他滨组(Capecitabine组)、蟾灵膏高剂量组(Chanling Gao high, CLGH)、蟾灵膏中剂量组(Chanling Gao middle, CLGM)、蟾灵膏低剂量组(Chanling Gao low, CLGL),每组12只:同时,选取12只与造模小鼠同样条件的小鼠作为正常组(Normal)。Normal、Model组给予0.2 ml生理盐水灌胃,每日一次: Capecitabine组给予0.359 g/kg的水溶液0.2 ml灌胃,每日一次,在给药5d后,停药2d,以此作为1疗程: CLGH组给子6.06 g/kg的水溶液0.2ml灌胃,每日一次: CLGM组给予3.03 g/kg的水溶液0.2 ml灌胃,每日一次: CLGL组给予1.52 g/kg的水溶液0.2ml灌胃,每日一次。均连续给药2周。一般指标观察:①每天观察并记录小鼠的一般情况,隔2天用电子称测量一次体质量;②给药结束后,次日用眼球取血法取得小鼠全血,脱颈法处死小鼠,用组织剪暴露腹腔,完整摘除小鼠肝脏,观察肝脏转移瘤情况,对肝脏转移灶数目进行计数,作好记录。并及时称取肝脏重量,计算肝脏指数。病理组织学指标:①HE染色观察小鼠肝脏转移瘤微观结构;②ELISA法检测小鼠血清中IL-6、VEGF的表达水平:③免疫组织化学法检测小鼠肝脏转移瘤中HIF-1α、VEGF、E-cadherin蛋白的阳性表达:④Western blot法检测肝脏转移瘤中IL-6、STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF和Snail的蛋白表达。
结果:一般指标:①Normal组小鼠体重呈逐渐增长趋势,但Model、Capecitabine、CLGH、CLGM、CLGL组小鼠因造模腹部多发转移瘤的原因,使得腹部均出现大小不一的膨出的肿块,导致小鼠体重增长趋势显著。②肝重及肝脏指数方面,与Normal组相比, Model组小鼠的肝重和肝脏指数明显增加(P<0.05):与Model组相比,Capeciabine、 CLGH、CLGM组小鼠肝重和肝脏指数减轻(P<0.05);与CLGL组相比,CLGH、 CLGM组肝重和肝脏指数减轻(P<0.05)。③肝转移瘤方面,在接种CT26细胞后,各组肝脏表面均布有大小不等的结节,其中Model、CLGL组肝脏结节较多; Capecitabine. CLGH、 CLGM组小鼠肝脏结界相对分布较少。与Model组相比,Capecitabine、 CLGH、CLGM组小鼠肝脏转移瘤明显减少(P<0.05);与CLGL组相比,CLGH、 CLGM组小鼠肝脏转移瘤也有所减少(P<0.05)。病理组织学指标:①HE结果发现,Normal组小鼠肝组织结构完整,细胞大小基本-致,细胞核边缘清晰,细胞质均匀,肝索排列规则,肝小叶结构清晰: Model组小鼠肝组织肝索排列紊乱,肝细胞呈不规则密集排列,可见细胞质缩小,细胞核增大,核质比例增大,出现不对称性、多极性核分裂,异型性明显: Capecitabine、 CLGH组小鼠肝组织肝索摆列尚规则,肝小叶:布局尚存,仍可见异型增生的细胞; CLGM组肝索摆列稍乱,可见大细胞及小细胞性异型增生,但较Model组明显减少; CLGL组肝索摆列较乱,明显可见大细胞,及小细胞性异型增生,核染色质致密。②ELISA结果提示,与Normal组比较,Model组小鼠血清中的IL-6、VEGF蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与Model组比较,Capeciabine、 CLGH、 CLHM组小鼠血清中的IL-6、VEGF蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与CLGL组相比,CLGH、 CLGM组小鼠血清中IL-6. VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05)。③免疫组织化学法检测结果提示,VEGF蛋白在Model组呈强阳性表达(+++),在Capecitabine组呈弱阳性表达(+),在CLGH组呈弱阳性表达(+),在CLGM组星阳性表达(++),在CLGL组呈强阳性表达(+++); HIF-1α蛋白在Model组呈强阳性表达(+++),在Capcitabine组呈弱阳性表达(+),在CLGH组呈弱阳性表达(+),在CLGM组呈阳性表达(++),在CLGL组呈强阳性表达(+++); E-cadherin蛋白在Model组呈弱阳性表达(+),在Capeciabine组呈强阳性表达(+++),在CLGH组呈强阳性表达(+++),在CLGM组呈阳性表达(++),在CLGL组呈呈弱阳性表达(+)。④Westem blot检测结果显示,与Normal组相比,Model组小鼠肝脏中IL-6、VEGF、 HIF-1α、 Snail、 p-STAT3蛋白的表达水平明显升高(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异:与Model组相比,Capecitabine、CLGH、CLGM组小鼠肝脏中IL-6、VEGF、HIF-1α、Snail、 p-STAT3蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异:与CLGL组相比,CLGH、CLGM组小鼠肝脏中IL-6、VEGF、HIF-1α、Snail、 p-STAT3蛋白的表达水平降低(P<0.05),STAT3蛋白表达水平无显著差异。
结论:(1)蟾灵膏具有改善CT26细胞建立的结直肠癌肝转移BALB/c小鼠模型肝重及肝脏指数,起到保护肝脏作用,并抑制肝脏转移瘤的生长。(2)蟾灵膏可以下调CT26细胞建立的结直肠癌肝转移BALB/c小鼠模型血清中IL-6、VEGF的蛋白表达水平以及小鼠肝脏微环境IL-6、p-STAT3、 HIF-1α、VEGF、Snail蛋白表达水平,上调E-cadherin的蛋白表达水平,从而起到抑制肝脏微环境新生血管的生成及上皮间质转化的过程。