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近年来的研究发现在昆虫体内含有一类ds RNA核酸内切酶(ds RNase),能够通过降解双链RNA(ds RNA)降低昆虫的RNAi效率。本论文利用小菜蛾全基因组数据库,筛选鉴定小菜蛾的ds RNase,通过体内与体外实验研究其对小菜蛾RNAi效率的影响。主要研究结果如下:依据部分鳞翅目昆虫ds RNase蛋白序列在小菜蛾基因组数据库中筛选出4个目的基因(Pxds RNase1、Pxds RNase2、Pxds RNase3和Pxds RNase4)。且Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3编码的蛋白含有信号肽和Endounuclease NS域,而基因Pxds RNase4编码的蛋白仅含有Endounuclease NS域。通过进化树分析发现,Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3与其他鳞翅目昆虫ds RNase的同源性最高,而Pxds RNase4与双翅目昆虫ds RNase同源性最高。表达模式分析发现,这4个基因都在小菜蛾4龄幼虫期表达量最高,其中Pxds RNase1和Pxds RNase4在各个龄期都有表达,而Pxds RNase2和Pxds RNase3只在幼虫期表达。Pxds RNase1在血淋巴中表达量最高,脂肪体中次之,其他组织中几乎无表达;Pxds RNase2和Pxds RNase3都几乎仅在中肠中表达,在血淋巴中表达量低;Pxds RNase4在各个组织中基本都有表达,无组织表达特异性。RNAi实验选用小菜蛾几丁质基因(Pxcht)作为报告基因,Pxcht的转录水平代表小菜蛾的RNAi效率。将Pxds RNase1、Pxds RNase2、Pxds RNase3和Pxds RNase4与Px Cht的混合ds RNA分别注射或喂饲虫体,EGFP与Px Cht的混合ds RNA为对照。在注射组中,注射Pxds RNase1、Pxds RNase2、Pxds RNase3实验组虫体Px Cht的表达量与对照组相比显著下降,且Pxds RNase1对小菜蛾RNAi效率的影响最大,Pxds RNase4实验组无明显效果;在喂饲组中,喂饲Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase4实验组虫体Px Cht的表达量与对照组相比在48 h时显著下降,而且在喂饲Pxds RNase4实验组发现Pxds RNase4的相对表达量没有变化,但Pxds RNase1的表达量却显著下降,说明Pxds RNase4的ds RNA会影响Pxds RNase1的表达,进一步降低小菜蛾的RNAi效率。ds RNA和重组蛋白Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3的孵育实现表明Pxds RNase1可降解ds RNA,Pxds RNase3能够切割ds RNA却不能完全降解,而Pxds RNase2不能切割ds RNA。这些结果表明Pxds RNase1、Pxds RNase2和Pxds RNase3降低小菜蛾的RNAi效率的机制可能不一样。