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第一部分兔骨髓间充质干细胞的分离、培养及标记 目的：探讨兔骨髓间充质干细胞的体外分离培养和标记方法,为进一步的实验研究打下基础。 方法：无菌条件下取下兔子双侧股骨,获取骨髓后全骨髓贴壁培养法培养骨髓间充质干细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态,采用细胞计数方法绘制传代培养的生长曲线;DAPI标记干细胞,免疫荧光显微镜观察荧光标记率,比较干细胞标记前后的生长情况。 结果：体外培养的兔骨髓间充质干细胞为贴壁生长,长梭形,可形成漩涡样结构;DAPI标记骨髓间充质干细胞后细胞核呈蓝色荧光,标记后干细胞生长状态良好,其生长特性和状态无明显改变。 结论：全骨髓培养法可获得纯度较高的骨髓间充质干细胞干细胞,原代培养和传代培养的BMSCs具有较好的增值能力;DAPI可成功标记兔骨髓间充质干细胞,对干细胞生长无影响。 第二部分兔慢性放射肺损伤模型的建立及鉴定 目的：探讨建立与临床时间情况相符的慢性肺损伤动物模型的可行性,为进一步实验研究奠定基础。 方法：新西兰白兔12只,分成右全肺照射组(n=8)和正常对照组(n=4),按SAD定角等中心照射技术照射建立慢性放射右全肺损伤兔模型,并于照射后第2、4、8w行CT及病理学检查。 结果：照射后4w内,CT和病理学检查呈急性肺炎表现;照射8w后,CT可见条索样改变,而HE染色镜下检查则见肺泡壁增厚呈纤维化改变,Masson染色见肺间质胶原纤维增多。 结论：按SAD定角等中心照射技术建立兔慢性放射肺损伤模型是可行的。 第三部分骨髓间充质干细胞对兔放射性肺损伤治疗的研究 目的：探讨骨髓间充质干细胞对慢性放射肺损伤的治疗作用及相关作用机制。 方法：全骨髓贴壁法分离培养兔骨髓间充质干细胞并用DAPI标记;建立兔慢性放射右全肺损伤模型,分为治疗组和对照组;将DAPI标记好的BMSCs经耳缘静脉注射入治疗组动物体内;在治疗后第2d,2w,5w、10w四个时间点,每组处死相同比例的实验动物,取其肺脏,行冰冻切片、免疫组化等检测研究干细胞对肺损伤的治疗作用及机制。 结果：干细胞移植后第2d,治疗组右肺组织冰冻切片可见明显标记干细胞,左肺见极少量标记干细胞,而对照组未见标记干细胞;2w时标记干细胞数量减少;HE染色可见实验组的肺纤维化程度较对照组明显减轻;免疫组化可见治疗组肺泡上皮凋亡因子Bax较对照组表达明显减弱,而凋亡抑制因子Bcl-2则较对照组表达增强。 结论：骨髓间充质干细胞可向放射损伤的肺组织聚集,并可减轻放射肺损伤肺组织的纤维化程度。