食物过敏是世界性的食品安全及卫生问题。作为八大致敏食物之一---花生，因其食用地域广和添加食物种类多，且其引发的过敏症存在潜在危险性、长期性而备受关注。本实验以花生致敏蛋白Arah2为研究对象，通过离心、沉淀、离子层析等方法进行提取纯化，制备单克隆抗体。在此基础上，利用免疫亲和层析技术实现花生致敏蛋白Arah2快速有效的纯化，最终制备花生致敏蛋白Arah2标准品，为食品中致敏蛋白成分检测提供基础材料。主要研究结果如下：1、花生致敏蛋白的分离提取以生花生为原料，根据花生的主要理化性质，依次采用了饱和硫酸铵沉淀、等电点沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析技术分离提取得到花生致敏蛋白粗提物。经SDS-PAGE分析和免疫印迹，结果显示在19kD处含有花生致敏蛋白Arah2,但在7-15kD左右仍有杂带，需进一步纯化。2、花生致敏蛋白Arah2单克隆抗体的制备花生致敏蛋白粗提液经免疫印迹法鉴定后，用试剂盒切胶回收进一步分离纯化得到单一的目标蛋白条带Arah2，约为19kD，回收效率在50-80%左右且保持蛋白活性。将回收纯化的Arah2免疫小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选克隆，制备单克隆抗体，筛选获得针对花生致敏原Arah2表位的两株单抗E12H1和D1A1，效价大于81000、亲和力强，为进一步研究免疫亲和层析提供了单克隆抗体，奠定了良好的基础。3、花生致敏蛋白Arah2标准品的制备将单克隆抗体与CNBr-Activated Sepharose4B凝胶介质偶联制备免疫亲和柱，并建立了花生致敏蛋白Arah2标准品制备得免疫亲和柱方法。以glycine-HCl为洗脱液，亲和柱亲和介质最大吸附容量达到6.83mg/ml、回收率在89.5%-93.4%之间。制备所得蛋白序列经检测与已知的Arah2免疫位点序列的匹配度极高，纯度大于99%，符合标准品的要求。本研究所建立的免疫亲和层析技术具有操作简易、成本较低、应用好等特点，致敏原标准品研制开发提供技术支撑，具有重要的现实的应用前景。