目的为快速鉴别外周血中乳腺癌细胞的存在,区别其与普通细胞,选取在细胞膜表面广泛存在的CD44糖蛋白作为结合位点,设计构建抗CD44糖蛋白的重组质粒,并利用Expi293F?细胞表达抗体蛋白的制备系统,获得高浓度、高纯度和生物活性的抗体蛋白,并鉴定其相应功能。方法采用聚合酶链式反应的方法,扩增疟原虫部分基因重组硫酸软骨素糖链(recombinant VAR2CSA,r VAR2)序列,并利用in-fusion酶将目的片段插入到原核表达载体p MIg V-his中,构建了全新的r VAR2-p MIg V-his重组质粒,重组质粒在Expi293F?悬浮细胞中表达生产融合蛋白,表达产物通过预处理后,利用His Trap纯化体系提纯目的蛋白,通过WB鉴定蛋白大小和特异性,利用ELISA鉴定融合蛋白与细胞膜CD44的结合,利用流式细胞仪检测目的蛋白与MDA-MB-231细胞和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)细胞的结合性。结果利用PCR方法扩增的目的片段大小与理论值相一致,基因测序结果显示整段序列与理论值一致,目的片段合成成功。重组质粒PCR方法和双酶切方法得到的片段大小与理论值相一致,基因测序结果显示整段序列与理论值一致,重组质粒构建成功。Expi293F?悬浮细胞生产蛋白系统,得到一定量的表达产物,通过预处理后,利用His Trap纯化体系提纯得到一定浓度的重组蛋白。通过WB分析蛋白的大小与理论值一致。ELISA显示融合蛋白能与底物硫酸软骨素A钠盐(来源于牛气管)(bovine trachea-Chondroitin sulfate A sodiumsalt,BT-CSA)和乳腺癌细胞膜蛋白CD44特异性结合,P<0.001。流式细胞术检测融合蛋白能与MDA-MB-231结合,而不能与PBMC结合。结论通过分子克隆技术和哺乳动物细胞蛋白生产系统成功构建了一种可能只与肿瘤细胞膜表面CD44糖蛋白结合的融合蛋白,该蛋白具有结合乳腺癌细胞胞外CD44糖蛋白的活性,而不能与PBMC表面的CD44糖蛋白结合,可以有效的区别外周血中的PBMC和乳腺癌细胞,为解决如何快速检测出外周血中乳腺癌循环肿瘤细胞的存在提供了实验依据,也为多克隆转移的新型治疗靶点提供了技术条件。