西兰花干硫苷的提取工艺优化及富集纯化研究

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硫苷(GS, Glucosinolates,硫代葡萄糖苷)是广泛存在于十字花科植物中的含硫亲水性葡萄糖衍生物。西兰花(broccoli)是十字花科芸苔属甘蓝变种之一,植株中含有各种硫苷且含量丰富,其中含量最大的为萝卜硫苷(Glucoraphanin,4-甲基亚磺酰基丁烯基硫苷)。其降解产物主要为萝卜硫素(Sulforaphane),具有明显的抗肿瘤活性。国际卫生组织建议食用较多的十字花科蔬菜来预防和治疗癌症。因此,探索硫苷的提取工艺及富集纯化方法,用于保健食品开发可以为人类健康发挥作用。本论文选取西兰花干为研究材料,研究了硫苷的各提取工艺参数,优化硫苷粗提液提取工艺,比较了几种富集纯化硫苷的方法,得出回收率较佳的方案,从而为工厂实际开发生产硫苷保健品提供理论依据及建议。结论如下:1、选取90%乙醇溶液作为硫苷的提取剂,在60℃条件下提取,可以有效提取硫苷,同时减少硫苷损失;通过单因素实验研究不同乙醇浓度、提取时间、料液比、提取次数对西兰花干硫苷的提取效果的影响,并中心组合实验对提取工艺进行优化。根据实际生产条件,得到西兰花干硫苷的最佳提取工艺:90%乙醇-水溶液、料液比1:11、提取时间1h、重复次数4次,得到硫苷粗提液的浓度为0.6827mg/mL,干物质质量为0.8972g,硫苷纯度为15.22mg/g,固形物得率为17.94%。2、研究了乙醇沉淀法对硫苷的沉淀效果,结果表明在95%乙醇、0℃条件下,硫苷的沉淀回收率为90.20%;研究发现沉淀时间为1h,硫苷含量为20.40mg/g,相比于未纯化的硫苷提高了34.03%。探索了氯化钙沉淀法对硫苷的纯化效果,41.35%的硫苷能通过生成硫酸钙盐沉淀下来,去除Ca2+过程有62.25%的硫苷损失,最终回收率为22.14%。该方法能避免长时间浓缩工序对硫苷产生损耗,为纯化硫苷方法提供新思路。同时比较了聚丙烯酰胺、食用单宁、硅胶和Sevag去蛋白法,研究得到Sevag去蛋白法硫苷损失最小,回收率为89.34%。3、比较几种食品级柱填料对硫苷的吸附效果,得到壳聚糖、高岭土和PVP/P对硫苷的吸附率仅为7.70%、2.52%和2.80%,作为西兰花干硫苷提取液中杂质的固相吸附剂,得到固体粉末中硫苷纯度分别为19.89mg/g、18.23mg/g和16.36mg/g,相比提取液分别提高了30.70%、19.79%和7.50%;活性炭粉末、D315大孔树脂和酸性氧化铝能高效吸附硫苷,其中洗脱效果最好的分别为葡萄糖酸内酯、氯化钙和碳酸铵溶液,回收率分别为41.34%、50.61%和86.72%;探索了活性炭粉末和酸性氧化铝的硫苷吸附饱和度,分别为28mg/g和16mg/g;比较复合柱对硫苷纯化效果,得到最佳方法为过高岭土一酸性氧化铝柱,硫苷浓度为0.5815mg/mL,回收率为84.62%,固体粉末质量为0.0182g,硫苷含量为31.95mg/g。该纯化方法提高了硫苷含量和纯度,且便于工厂实际生产。4、探索了离心处理及超声处理对硫苷的洗脱效果,发现离心1次和超声1次分别比对照组提高8.01%和44.58%;比较了洗脱剂用量,发现5mL洗脱剂用量能洗下大部分硫苷。上述方法为进一步纯化硫苷提供理论依据。
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