紫穗槐叶黄酮类化合物的提取、纯化、初步鉴定研究

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紫穗槐为豆科植物,南北方均有种植,在公路绿化,园林造景方面得到广泛的应用。它有很强的固土护坡,改良土壤的能力。黄酮类化合物是植物的次级代谢产物,广泛存在于绿色植物中,尤以菊科、豆科、芸香科、玄参科和唇形科等高等植物中含量较高。黄酮类化合物在根瘤菌侵染过程中具有指示作用,而且在植物UV保护、花色素形成等方面起到促进的作用。紫穗槐的抗逆性与根瘤的结成有着重要的关系,而黄酮类化合物的调控又是根瘤形成过程中的重要一环。近年来,对紫穗槐生理特性的研究很多,但是对紫穗槐叶提取黄类化合物鲜有报道。本实验以紫穗槐叶为原料,利用先进的提取方法,合理的实验设计,科学的结果分析,确定紫穗槐叶中黄酮类化合物的含量、优化提取方法的工艺参数、优化大孔树脂纯化工艺参数以及对提取物进行初步鉴定。主要实验结果如下:(1)超声波法工艺优化参数:在液料比、提取功率、乙醇浓度、提取时间和提取次数的单因素基础上,以正交实验和响应面实验两种实验模型相互验证的方法,共同确定工艺优化参数。最优条件为:液料比50m1/g;提取功率316 W;乙醇浓度50%;提取次数4。黄酮类化合物的含量为66.43 mg/g。实验因素对黄酮类化合物提取量影响的强弱关系为:提取次数>乙醇浓度>液料比>提取功率(2)微波水浴法工艺优化参数:在乙醇浓度、提取时间、提取次数、水浴温度、液料比的单因素基础上,以正交实验和响应面实验两种实验模型相互验证的方法,共同确定工艺优化参数。最优条件为:乙醇浓度60%、提取时间6min、液料比60ml/g、水浴温度80-C。提取黄酮得量为72.09 mg/g。实验因素对总黄酮得量影响的强弱关系为:乙醇浓度>水浴温度>料液比>提取时间(3)大孔树脂纯化工艺优化参数:以总纯化率为指标,在静态吸附解吸下,筛选最佳大孔树脂和溶解黄酮粗提物的乙醇浓度;在动态吸附解吸下,以单因素为基础,研究上样浓度、上样流速、上样量、上样PH、洗脱乙醇浓度、洗脱流速对总纯化率的影响。结果表明:用10%乙醇溶解黄酮粗提物,大孔树脂D101分离纯化样品液。最佳工艺:上样浓度1.5mg/ml,上样流速3ml/min,上样量100ml,上样pH=4,洗脱乙醇浓度70%,洗脱流速3ml/min。在此工艺条件下,能科学合理地分离纯化类黄酮,所得类黄酮含量为56.2%,较纯化前18.9%提高了2.9倍。(4)初步鉴定结果:利用颜色反应和紫外光谱特征鉴定紫穗槐叶中黄酮类化合物组分类型。确定主要的黄酮类化合物类型为:黄酮类和黄酮醇类(3-OH取代)物质。
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