【摘 要】
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丙二酸盐克罗诺杆菌在婴幼儿、儿童以及免疫力低下的成年人中具有广泛的致病性,能引起诸如败血症、坏死性小肠结肠炎和脑膜炎等多种临床症状。同时,该菌具备极强的干燥耐受性能长时间存活在水分活度较低的食品中,增加了人类感染患病的风险。然而,目前对于克罗诺杆菌干燥耐受机制的认识尚不完善。噬菌体休克蛋白（the phage shock protein,Psp）家族能响应外界多种环境变化,维持细胞内环境稳定,保护
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丙二酸盐克罗诺杆菌在婴幼儿、儿童以及免疫力低下的成年人中具有广泛的致病性,能引起诸如败血症、坏死性小肠结肠炎和脑膜炎等多种临床症状。同时,该菌具备极强的干燥耐受性能长时间存活在水分活度较低的食品中,增加了人类感染患病的风险。然而,目前对于克罗诺杆菌干燥耐受机制的认识尚不完善。噬菌体休克蛋白（the phage shock protein,Psp）家族能响应外界多种环境变化,维持细胞内环境稳定,保护机体不受侵害。Psp家族已多次被报道涉及细菌包膜应激反应,但该家族在克罗诺杆菌中的作用研究仍处于空白阶段。本课题选取丙二酸盐克罗诺杆菌野生株WT和Psp系统突变株（?psp A、?psp B、?psp C和?psp G）作为研究对象。文章先对干燥胁迫下的转录组学数据进行系统分析,利用q RT-PCR实验验证psp A、psp B、psp C和psp G基因在干燥处理下能显著表达。其次对该系统进行生物信息学分析,阐明了Psp家族蛋白的理化性质和分子特性;然后通过表型对比研究得出干燥胁迫下突变株的存活率明显低于野生株;敲除psp A、psp B、psp C和psp G基因影响了菌株的生物膜形成能力;psp A和psp G基因的缺失对菌株的运动能力有影响等结果,以上结果初步证明了Psp系统为丙二酸盐克罗诺杆菌耐干燥胁迫的重要调控系统。最后本课题利用基因工程技术对psp A、psp B、psp C和psp G基因进行克隆,并成功构建了p ET28a-EGFP-Psp A、p ET28a-EGFP-Psp B、p ET28a-EGFP-Psp C和p ET28a-EGFP-Psp G重组质粒以及诱导其表达,为后续Psp家族蛋白的特性和功能研究提供实验基础。
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