【摘 要】
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目的:观察研究miRNA-146a于LPS小鼠脓毒症模型中巨噬细胞的功能变化,探讨脓毒症miR-146a和免疫功能紊乱及自噬的关系;为进一步探索miR-146a对脓毒症巨噬细胞活化、自噬机能的调控作用与分子机制提供初步的实验依据。方法:选择健康雄性BALB/C 6-8周龄小鼠120只,按随机数字表法分为空白对照组、脓毒症实验组,实验前禁食12小时,自由饮水,体内构建LPS脓毒症动物模型小鼠20只（
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目的:观察研究miRNA-146a于LPS小鼠脓毒症模型中巨噬细胞的功能变化,探讨脓毒症miR-146a和免疫功能紊乱及自噬的关系;为进一步探索miR-146a对脓毒症巨噬细胞活化、自噬机能的调控作用与分子机制提供初步的实验依据。方法:选择健康雄性BALB/C 6-8周龄小鼠120只,按随机数字表法分为空白对照组、脓毒症实验组,实验前禁食12小时,自由饮水,体内构建LPS脓毒症动物模型小鼠20只（剂量为10mg/KG）,正常对照小鼠20只,观察动物一般情况,绘制7天生存曲线。另取正常小鼠12只为control组,LPS脓毒症动物模型小鼠60只（剂量为10mg/KG）为LPS组,分别于6、12、24、36、48 h处死动物眼眶取血,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-q PCR）检测miR-146a表达;用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定瘤坏死因子-α（TNF-α）,IL-1β水平;通过Western blot检测各组小鼠巨噬细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达自噬水平及NF-κB相关通路蛋白表达水平变化;测定肺组织湿/干质量（W/D）比值,在HE染色光镜下观察各组小鼠肺组织器官的病理学改变,并行病理学损伤评估以及透射电镜下观察各组肺组织自噬小体数目。结果:1.脓毒症组与对照组相比7天生存率明显降低（P<0.05）,24h生存率最低为40%,24h后生存率无明显变化;2.LPS组各时间点肺病理组织学均出现肺组织的损伤。肺泡腔内大量炎症细胞浸润,肺泡间隔增宽,大量肺泡萎陷结构消失,部分肺泡内可见出血,以LPS组6h、12h及24h时间点的肺组织损伤明显;与对照组比较,LPS组各时间点肺W/D比值均升高（均P<0.05）,24h升高最明显;3.LPS组各时间点IL-1β与对照组相比较均升高,24h升高最明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。LPS组各时间点TNF-α与对照组比较均升高明显,12h最高,差异均有统计学意义（P<0.05）;4.与对照组相比,LPS组miR-146a表达量均明显上调（P<0.05）;在6h、12h及24h呈升高趋势,之后回落,24h表达量最高;LPS组miR-146a表达量与对照组比较均有统计学差异（P<0.05）。5.通过Western blot检测发现,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ结果,LPS组各时间点中随时间逐渐升高而后逐渐降低,24h最高。LPS组小鼠腹腔巨噬细胞中的TRAF蛋白表达水平在6h、12h逐渐增高,之后逐渐降低,LPS组小鼠腹腔巨噬细胞中的NFκB相关蛋白P65在各时间点逐渐升高,24h最高。与对照组比较均有统计学差异（P<0.05）。6.透射电镜观察发现LPS组各时间点肺组织内自噬小体数量明显高于对照组,24h最高,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）.LPS小鼠脓毒症模型中早期出现炎症变化,与NF-κB信号通路的关键蛋白表达一致;（2）.自噬相关蛋白及miR-146a的表达在相应时间点呈升高趋势。结果表明脓毒症自噬的发生与miR-146a的表达可能存在相关性;（3）.LPS脓毒症模型中巨噬细胞可能通过上调miR-146a抑制NF-κB信号通路介导的炎症表达而激活巨噬细胞自噬,对机体产生保护作用。
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