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实验目的:研究沉默PPARγ2在BMP9介导的C2C12细胞成骨分化的影响及可能机制。实验方法：采用化学发光测定法、组织化学染色、PCR、Western blotting、萤光素酶报告质粒等技术，研究沉默PPARγ2在BMP9诱导的小鼠C2C12细胞成骨分化的影响。具体方法如下：1．检测单独及联合使用AdSimPPARγ2、AdBMP9后，C2C12细胞早期成骨指标碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）的活性变化。2．从基因表达水平和蛋白质表达水平检测单独及联合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后,C2C12细胞早期成骨指标的表达情况3．检测AdSimPPARγ2和/或AdBMP9对C2C12细胞成脂分化转录因子C/EBP的影响。4．检测单独及联合使用AdSimPPARγ2和/或BMP9后，晚期骨钙蛋白（OCN）的表达及矿化基质沉积的变化。5．利用报告质粒及Western blotting，检测使用AdSimPPARγ2和/或BMP9对BMPR-Smad信号通路转录活性的影响。6．利用Western blot，检测使用AdSimPPARγ2和/或BMP9对PTEN信号通路转录活性的影响。7.利用RT-PCR，检测使用AdSimPPARγ2和/或BMP9对IGF1细胞因子的影响，利用条件培养基，过表达IGF1，比较IGF1与AdSimPPARγ2对细胞碱性磷酸酶活性的影响。实验结果:1．AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用增强早期C2C12细胞ALP活性。2．AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用增加AdBMP9诱导的C2C12细胞早期成骨转录因子的表达。3．AdSimPPARγ2和BMP9联合应用能抑制AdBMP9诱导的C2C12细胞成脂分化因子C/EBP的表达。4． AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用抑制AdBMP9诱导的晚期骨钙素的表达并减弱C2C12细胞矿化基质沉积。5． AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用仅能在早期激活BMPR-Smad信号通路。6．AdSimPPARγ2和AdBMP9联合应用能抑制AdBMP9诱导的PTEN信号通路。7. AdSimPPARγ2促进AdBMP9诱导的C2C12细胞早期成骨中IGF1基因表达，从而增强早期成骨分化。实验结论：沉默PPARγ2能明显增强BMP9诱导的C2C12细胞的早期成骨分化，但抑制了晚期的成骨分化。早期的增强作用可能与增强BMPR-Smad信号转录活性、抑制PTEN信号转录活性及上调IGF1细胞因子的表达的有关，而晚期的抑制可能与BMPR-Smad信号转录活性逐渐减弱有关，晚期成骨受抑制的具体机制有待进一步研究。