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目的: 构建与鉴定锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide species，MnSOD）过表达的慢病毒载体，体外转染食管鳞癌（Kyse410，Kyse180）细胞株，使其过表达MnSOD蛋白，初步探讨过表达MnSOD对Kyse410、Kyse180增殖及侵袭性的影响，为以后进一步实验奠定基础，以便于深入研究MnSOD与食管癌的关系。 方法: 1.PCR扩增人MnSOD cDNA基因序列（SOD2），构建于pLenti-CMV-MCS-HA-3Flag-P2A-LUC载体EcoRI–HA-tag-BamHI-3Flag序列间的EcoRI和BamHI多克隆位点，和3Flag序列融合表达，将其转化至E.coliDH5α感受态细胞，菌落 PCR检测阳性转化子，并测序分析，质粒抽提得到慢病毒过表达质粒pLenti-CMV-MCS-SOD2-3Flag-P2A-LUC（LV1），以LV1为模板PCR扩增SOD2+3Flag基因序列，构建于LV1中Hpa I–luc-Age I序列间的Hpa I和Age I多克隆位点，代替 luc序列，经 PCR检测及测序分析，证实慢病毒过表达质粒pLenti-CMV-MCS-SOD2-3Flag-P2A-SOD2-3Flag-T2A-Puro（LV2）是否构建成功。Western Blot法检测LV1及LV2转染293T细胞过表达情况，选择LV2使用四质粒包装系统进行包装、纯化，qRT-PCR方法检测病毒滴度。Western Blot法鉴定病毒过表达情况。 2.利用该慢病毒及绿色荧光对照慢病毒载体（CMV-GFP-L.V.）分别转染两株MnSOD低表达的食管鳞癌细胞（Kyse410，Kyse180），建立MnSOD过量表达的食管鳞癌稳转细胞株（Kyse410-MnSOD，Kyse180-MnSOD）及空载体对照细胞株，再以Western Blot法检测稳转细胞株的蛋白表达情况。 3.MTT法检测过表达MnSOD对食管癌Kyse410，Kyse180细胞增殖的影响，Transwell肿瘤侵袭实验观察过表达MnSOD对食管癌Kyse410，Kyse180细胞侵袭性的影响。 结果: 1.经测序及Western Blot法检测，过表达慢病毒质粒构建成功，采用四质粒系统包装、纯化，转染293T细胞后经qRT-PCR方法测定病毒滴度为5.14×108TU/ml，Western Blot法检测有表达，过表达慢病毒构建成功。 2.使用过表达慢病毒及对照绿色荧光慢病毒转染食管鳞癌（Kyse410，Kyse180）细胞株，在MOI为80条件下，Kyse410细胞感染效率约为60％。在MOI为40条件下，Kyse180细胞感染效率约为80%，经筛选后获得稳定过表达目的基因SOD2的食管鳞癌稳转细胞株（Kyse410-MnSOD,Kyse180-MnSOD），分别使用Flag抗体及SOD2抗体经WesternBlot法检测证实稳转细胞株有表达，灰度分析结果表明 Kyse180-MnSOD与Kyse180细胞株相比MnSOD表达量相对值为5.46，Kyse410-MnSOD与Kyse410细胞株相比MnSOD表达量相对值为9.42，过表达食管鳞癌细胞株构建成功。 3.MTT法检测细胞增殖能力、Transwell肿瘤侵袭实验提示Kyse180-MnSOD、Kyse410-MnSOD增殖及侵袭能力增强（P＜0.05）。 结论: 成功构建了MnSOD过表达慢病毒载体，获得了较高的病毒滴度。MnSOD过表达慢病毒载体成功转染食管鳞癌细胞（Kyse180，Kyse410），成功构建过表达MnSOD的食管鳞癌细胞株（Kyse410-MnSOD,Kyse180-MnSOD），MnSOD过表达使食管鳞癌细胞株Kyse180、Kyse410增殖及侵袭能力增强。为下一步继续细胞生物学功能实验、以及进一步探讨MnSOD与食管鳞癌的关系打下了基础。