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目的：体外构建R675Q突变的人骨骼肌钠离子通道（pRcCMV-R675Q-SCN4A）真核表达载体，磷酸钙沉淀法转染HEK-293细胞，研究突变钠电流的电生理特点，进一步解释周期性麻痹的发病机制，为从分子水平诊断和更有效的治疗本病打下基础。方法：设计带突变位点的引物，以含有人骨骼肌钠离子通道cDNA的质粒为模板体外定点诱变，构建R675Q突变型人骨骼肌钠离子通道真核表达载体。质粒大提取试剂盒抽提、纯化质粒后脂质体瞬时转染到HEK—293细胞中，转染24h和48h后，用RT-PCR和Western—blot方法验证目的基因的和蛋白的表达水平；磷酸钙沉淀法瞬时转染质粒后24h全细胞记录钠通道的门控特点。结果：1．测序证实pRcCMV-R675Q-SCN4A在相应位点有突变。2．转染后24h和48h，通过RT-PCR可以检测到目的基因的表达，其中未转染细胞的相对光密度为0.34±0.044，转染24h后为0.72±0.05，转染48h后为0.79±0.04；转染后目的基因表达量显著增加（p＜0.01）。转染后24h和48h通过Western—bolt可以检测到目的蛋白的表达，未转染细胞相对光密度为0.09±0.01，，转染后24h为0.57±0.06，转染后48h为1.15±0.04；转染后目的蛋白表达量显著增加（p＜0.01）。3．野生型（widetype WT）钠电流平均峰值（1798.9±106.5pA；n=35）高于R675Q突变型钠电流平均峰值（1035.6±57.3pA；n=22），统计学处理有显著差异（p＜0.01）。R675Q突变型钠电流的快速失活和失活后恢复的特点和WT型相似，快速失活及恢复时间常数ζ的统计学处理无显著差异。R675Q钠通道的快速激活的电压电导（G-V）曲线V1／2相对WT钠通道向去极化方向移动约7mv，统计学处理有显著差异（p＜0.01）。4．40s预刺激（conditioning pulse CP）后细胞慢失活电流达到稳态，可以得到慢失活的电压依赖性特点。R675Q慢失活明显提高，其电压依赖性曲线较WT向超极化方向移动约29mv。5．通过改变CP的时间得到钠通道进入慢失活状态的比率。在CP为—75mv和—10mv时，R675Q和WT钠通道进入慢失活的比率大致相同，R675Q钠通道在长时间的预刺激后相对电流INa更小，进入慢失活的程度明显提高，其衰减时间常数ζ为7.93s±0.58s，WT为2.83±0.15s，统计学处理有显著差异（p＜0.01）。6．通过设计一系列protocal研究长时间预刺激后钠通道的恢复过程，预刺激时间在40ms到60s之间变动。40ms预刺激后，R675Q通道从快速失活中恢复的时间常数（5.77±1.62ms；n=6）与WT型（3.47±0.87ms；n=6）相似，统计学处理无显著差异（p＞0.05）。1s预刺激后，R675Q从快速失活中恢复的时间常数（2.99±0.76ms；n=6）与野生型（2.48±0.22ms；n=6）统计学处理无显著差异；R675Q钠电流中间成份的恢复时间（357.08±17.08ms；n=6）慢于野生型（67.11±5.01ms；n=6）。60s预刺激后，中间成份的恢复过程与1s预刺激后相似，R675Q恢复时间（658.9±78.09ms；n=6）明显迟于WT（180.2±12.12ms；n=6）；R675Q慢成份恢复时间（16.3±3.08s；n=6）也相对WT（6.96±0.8s；n=6）延长。7．240s的预刺激后，用一系列的测试刺激来研究钠通道的恢复过程。R675Q中间成份恢复时间（654.9±93.5ms：n=6）慢于（273.9±48.2ms；n=6）。R675Q慢成份恢复时间（47.8±4.9s；n=6）慢于（21.3±2.4s；n=6）。结论：1．成功构建了周期性麻痹SCN4A基因R675Q突变的细胞模型。2．转染基因后通过RT-PCR和Western—blot证实了目的基因和蛋白的表达。3．R675Q突变提高了激活，但是对快速失活及失活后恢复没有明显影响；明显损害了慢性失活，使其慢失活和从慢失活中恢复时间延长；提示DⅡS4可能参与了通道激活及慢失活。