灰葡萄孢是一种寄主范围广泛,危害特别严重的植物致病真菌。我们的前期研究表明灰葡萄孢BcChsⅤ基因敲除后几丁质含量增加了31%,而致病力无明显变化。由于BcChsⅥ与BcChsⅤ相似,都具有肌动蛋白头结构域,所以本实验对BcChsⅥ价基因功能进行研究。实验通过Gateway技术构建BcChsⅥ基因敲除双元载体pCAMBIA-Bar-chs6,并采用根癌农杆菌介导法转化灰葡萄孢得到了 5个稳定的转化子,经PCR和RT-PCR分子鉴定确证其中2个为阳性转化子即Bcchs6-7和Bcchs6-8突变株。随后,对野生型菌株和Bcchs6突变株进行了一系列生物学特性实验研究,包括表型观察,生长速率测定,药物敏感性测定,山梨醇挽救实验,几丁质含量测定以及致病性检测等,结果表明,Bcchs6突变株较野生型菌株生长稀疏、低矮,气生菌丝极其不发达,菌丝出现坏死和破裂现象,且无菌核形成,生长速率下降,对细胞壁和细胞膜抑制性药物显著敏感,几丁质含量增加45.5%,致病能力显著下降。此外,我们还进行了灰葡萄孢Bcchs6突变株的遗传互补研究,通过构建重组质粒pETHG-BcChsⅥ,然后经LR反应成功获得了具有草铵膦抗性筛选标记的双元载体pCAMBIA-Bar-BcChsⅥ,再将双元载体导入农杆菌AGL-1感受态细胞中,同样经农杆菌介导的转化实验获得3株Bcchs6突变株遗传互补转化子,实验发现互补菌株生物学特性有所恢复。经正反两方面对BChsⅥ基因的研究分析,可以推测BcChsⅥ基因对灰葡萄孢菌株生长、几丁质合成和致病侵染力均有重要影响,说明BcChsⅥ基因在保证灰葡萄孢细胞壁完整性,维持真菌正常生长等方面非常重要。