【摘 要】
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目的:Nrf2信号通路是调节氧化还原平衡的核心因子,是生物体内抵御外源性刺激的重要保护系统。研究显示,大量的氧化应激和炎症信号转导参与了肝纤维化的发生发展。本课题的研究目的即探讨在肝星状细胞的活化进程中,通过诱导Keap1降解,促进Nrf2抗氧化信号通路的激活,从而为肝纤维化治疗提供新的思路及实验基础。方法:(1)设计并合成基于PROTAC技术的融合肽(KKP)并检测其在HSC-T6细胞中的穿膜作
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目的:Nrf2信号通路是调节氧化还原平衡的核心因子,是生物体内抵御外源性刺激的重要保护系统。研究显示,大量的氧化应激和炎症信号转导参与了肝纤维化的发生发展。本课题的研究目的即探讨在肝星状细胞的活化进程中,通过诱导Keap1降解,促进Nrf2抗氧化信号通路的激活,从而为肝纤维化治疗提供新的思路及实验基础。方法:(1)设计并合成基于PROTAC技术的融合肽(KKP)并检测其在HSC-T6细胞中的穿膜作用;(2)Western blot法检测KKP在HSC-T6细胞中能否降解Keap1总蛋白含量;(3)荧光素酶报告基因技术分析KKP对抗氧化反应元件ARE、及NF-κB相应应答元件报告基因表达的影响;(4)Western blot法检测KKP在HSC-T6细胞中Nrf2下游抗氧化基因NQO-1、NF-κB通路相关基因IL-6的蛋白表达影响;(5)Western blot法检测KKP在HSC-T6细胞中对I型胶原蛋白表达的影响。结果:(1)基于PROTAC技术设计合成三条分别为高亲和力(KKP1)、低亲和力(KKP2)和无亲和力(KKPs)的的融合肽(KKP),并且三条融合肽KKP在HSC-T6细胞中的穿膜作用较好;(2)KKP1能招募HSC-T6细胞中Keap1蛋白诱导其泛素化降解;(3)KKP1可促进HSC-T6细胞中ARE应答元件调控的基因表达,促进Nrf2下游抗氧化分子GCLC、NQO-1的蛋白表达;(4)KKP1可抑制HSC-T6细胞中NF-κB应答元件调控的基因表达,且下调IL-6蛋白的表达;(5)KKP1可上调HSC-T6细胞中Col1α2蛋白的表达。结论:含有与Keap1结合域有高度亲和力的短肽的融合肽KKP1可以穿膜进入胞内,招募Keap1蛋白诱导其泛素化降解,从而释放Nrf2入核,促进Nrf2/ARE通路转录活性,激活Nrf2下游抗氧化因子,同时抑制NF-κB炎症信号通路及其下游炎症因子,发挥抑制肝星状细胞活化的作用。提示基于PROTAC技术的融合肽KKP1可能为肝纤维化治疗提供新的思路。
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