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哺乳动物皮肤组织是机体内结构较为复杂,并且拥有较强的自我修复能力的一种组织。近年来的研究发现皮肤中包含多种不同类型的细胞,干细胞群体也包括在内,这些干细胞有毛囊干细胞、毛囊真皮干细胞、真皮间充质干细胞、内皮干细胞和造血干细胞等。Freda Miller实验室在2001年首次报道了皮肤组织来源的一类新型干细胞群,并命名为皮肤源性前体细胞(Skin-derived precursor cells,SKPs)。这些细胞是使用培养神经干细胞(Neural stem cell,NSCs)的方法分离得到,并能够继续增殖,形态上也来类似于神经干细胞。当在体外诱导培养液中,SKPs可以分化成为神经外胚层的神经胶质细胞和神经元,以及中胚层的平滑肌细胞和脂肪细胞。SKPs细胞代表了一类容易获得,并具有多向分化潜能的自体来源细胞,受到干细胞与再生医学领域研究人员的广泛关注,作为潜能性干细胞研究为将来治疗神经性疾病提供可能。目前,研究人员已经陆续的从小鼠、人、以及猪的皮肤中分离到了皮肤源前体细胞,但是牛的SKPs至今尚未见报道。本研究的目的主要是分离得到牛的SKPs,并且将其作为核移植供体细胞的核移植效率。实验结果和内容下:1.本研究成功分离得到了牛胎儿的SKPs。分离得到的细胞,通过免疫荧光鉴定表明SKPs能表达系谱相关蛋白:巢蛋白、波形蛋白和纤粘蛋白;多能性相关基因:OCT4、NANOG和SOX2。通过实时定量PCR鉴定发现SKPs的神经嵴相关转录因子:NGFR、SNAI2、PAX3、SOX9相对于牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonicskin fibroblasts,BEF)有较高峰度的表达。免疫荧光检测:GFAP、β-III-tubulin和MAP2的表达来确认SKPs细胞团的分化状态。结果发现,这三种基因均没有表达。这说明SKPs细胞团中细胞处于未分化状态。通过体外诱导实验SKPs可以分化为神经外胚层的神经细胞和神经胶质细胞,以及中胚层的平滑肌细胞。这些结果证明了分离得到的细胞,具有SKPs的特性。通过Western blot结果显示,牛SKPs的H3K9m3水平远低于胎儿成纤维细胞提示SKPs细胞更容易被重编程。2.分离得到的SKPs细胞用于核移植供体细胞,研究发现其具有较高的核移植效率。将BEF作为供体细胞为对照组,进行牛的核移植实验,比较了两组核移植胚胎的体外发育情况。结果发现:SKPs组的克隆胚胎的卵裂率为79.50%,显著高于成纤维组的68.25%(P<0.05),SKPs组第7d克隆囊胚率为41.25%,也显著高于成纤维组的21.00%(P<0.05);SKPs组的孵化率18.75%,也显著高于成纤维组7.5%(P<0.05)。为了比较各组的胚胎质量,我们分析了各组囊胚的细胞总数。结果显示,SKPs组囊胚的胚胎细胞总数显著高于成纤维组(P<0.05)。说明牛的SKPs细胞作为供核细胞的核移植效率优于牛胎儿成纤维细胞,可以作为牛核移植较好的供核细胞候选者。本研究成功分离得到牛的SKPs。SKPs细胞作为核移植供体细胞,其核移植效率显著高于BEF组。这就为提高牛的核移植效率提供了优秀的供体细胞。