研究背景:　　5-脂氧酶（5-lipoxygenase，5-LOX）代谢产物半胱氨酰白三烯(cysteinylleukotrienes，CysLTs)是重要炎症介质。CysLTs通过激动半胱氨酰白三烯受体（cysteinyl leukotriene receptor，CysLTR）发挥效应。我们已经发现，5-LOX和CysLT1R参与帕金森病（Parkinsons disease，PD）小胶质细胞激活及神经炎症。但是，CysLT2R是否调节PD小胶质细胞激活和神经元损伤，尚待阐明。我们拟在PD诱导因子MPP+和LPS诱导BV2小胶质细胞激活和神经元样PC12细胞损伤模型，研究CysLT2R在PD小胶质细胞激活及其神经毒性中的作用，本项目旨在阐明CysLT2R作为PD神经保护新靶点的意义。　　研究方法:　　在小鼠小胶质细胞系BV2细胞，以PD诱导因子MPP+和LPS诱导BV2细胞激活变化，观察CysLT2R在MPP+和LPS诱导的BV2细胞激活中的表达改变，以及这种改变与BV2小胶质细胞激活的关系;进一步在大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株PC12细胞，研究CysLT2R是否通过激活BV2细胞进而损伤神经元;在上述实验模型，评价CysLT2R选择性拮抗剂HAMI3379对MPP+和LPS诱导的BV2小胶质细胞激活及其神经毒性的药理学效应;并以慢病毒CysLT2R shRNA靶向沉默CysLT2R基因表达，观察CysLT2R RNA干扰对MPP+和LPS诱导的BV2小胶质细胞激活及神经元毒性的影响。　　研究结果:　　第一部分CysLT2R介导MPP+诱导的BV2小胶质细胞激活　　首先，为阐明CysLT2R对PD小胶质细胞激活的调节作用，我们在BV2小胶质细胞培养观察了PD诱导因子MPP+诱导的改变。结果表明，MPP+（0.03，0.1μM）诱导BV2细胞激活（细胞活性和吞噬功能增强、炎症细胞因子TNF-α、 IL-6和IL-1β释放增加）;Western blot和免疫荧光染色检测发现，MPP+浓度和时间依赖性的诱导BV2细胞CysLT2R表达和移位。CysLT2R选择性拮抗剂HAMI3379抑制MPP+诱导的BV2细胞激活。此外，RT-PCR和Western blot方法证实，本研究采用的CysLT2R shRNA成功抑制BV2细胞CysLT2R表达和MPP+诱导的BV2细胞激活。这些发现表明CysLT2R介导MPP+诱导的BV2小胶质细胞激活。　　第二部分CysLT2R介导LPS诱导的BV2小胶质细胞激活　　其次，为进一步确定CysLT2R在PD小胶质细胞激活中的作用，我们观察了PD炎症诱导因子LPS诱导的BV2小胶质细胞改变。我们发现，LPS(10，100 ng/ml)诱导BV2细胞活性和吞噬功能增强，炎症细胞因子TNF-α、 IL-6和IL-1β释放增加。同时，LPS浓度和时间依赖性的诱导CysLT2R表达和移位。HAMI3379和CysLT2RshRNA抑制LPS诱导的BV2细胞上述效应。结果提示CysLT2R介导LPS诱导的BV2小胶质细胞激活。　　第三部分CysLT2R在BV2小胶质细胞依赖的MPP+和LPS神经毒性中的作用　　最后，为明确PD小胶质细胞激活是否引起神经元损伤，我们在神经元样PC12细胞培养观察了CysLT2R在BV2小胶质细胞介导的MPP+和LPS神经毒性中的作用。结果表明，以LPS(100 ng/ml)直接处理PC12细胞，对PC12细胞无明显毒性作用;以MPPP+（0.1μM）直接处理PC12细胞，可轻度诱导细胞活性下降和死亡;但是，应用MPP+和LPS预处理的BV2细胞条件培养液(conditioned medium，CM)培养PC12细胞，细胞毒性明显增强;HAMI3379和CysLT2R shRNA抑制BV2 CM诱导的PC12细胞活性下降和死亡。这些结果表明CysLT2R可能通过调节BV2小胶质细胞激活，增强MPP+和LPS对PC12细胞的神经毒性，MPP+和LPS诱导的BV2小胶质细胞激活与PC12细胞死亡密切相关。　　研究结论:　　1.在小鼠小胶质细胞系BV2细胞，CysLT2R介导PD诱导因子MPP+和LPS诱导的BV2小胶质细胞激活，BV2细胞活性与吞噬功能增强、炎症细胞因子释放增加。　　2.在神经元样PC12细胞，CysLT2R可能通过调节BV2小胶质细胞激活，增强MPP+和LPS诱导的神经毒性。　　3.CysLT2R选择性拮抗剂HAMI3379和CysLT2R RNA干扰减轻MPP+和LPS诱导的BV2小胶质细胞激活及BV2细胞介导的PC12细胞死亡。　　4.这些结果表明，CysLT2R参与MPP+和LPS诱导的BV2小胶质细胞激活，并通过激活BV2细胞进而损伤神经元。CysLT2R可能成为PD小胶质细胞炎症和神经毒性治疗的新靶点。