羊传染性脓疱病是由传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染引起以绵羊、山羊为主的一种急性、高度接触性传染病。以在患羊口唇等部位的皮肤或黏膜形成红斑、脓疱等病变为主要特征。同时,它也是一种重要的人兽共患病。课题组前期研究发现,宿主因子亲环蛋白B(Cyclophilin B,Cyp B)能够促进ORFV的复制增殖。然而,Cyp B在ORFV侵染过程中发挥怎样的生物学功能,而ORFV又是如何利用Cyp B促进其复制增殖并完成侵染的过程尚不明确。因此,本研究对Cyp B在ORFV侵染过程中潜在的生物学功能进行探讨分析,并利用免疫共沉淀技术对与Cyp B互作的病毒蛋白或蛋白质分子群进行筛选。为明确Cyp B在ORFV侵染过程中潜在的生物学功能,首先利用激光共聚焦显微镜对Cyp B在感染前后宿主细胞中的定位分布情况进行检测;同时制作细胞超薄切片,利用透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化以及Cyp B蛋白的定位分布,结果显示,Cyp B主要分布在MDBK细胞的粗面内质网上。之后,应用内质网红色荧光探针ER-Tracker Red进行荧光标记,利用激光共聚焦扫描显微镜观察Cyp B在亚细胞水平上的定位分布,结果显示,在ORFV感染的宿主细胞中,Cyp B与内质网存在明显的共定位现象,该结果进一步证实Cyp B主要定位分布于MDBK细胞的粗面内质网。利用特异性抑制剂环孢菌素A(Cs A)改变Cyp B的顺反异构酶活性,探讨其活性改变对ORFV感染宿主细胞能力的影响。利用Western-blot检测在ORFV早期感染MDBK细胞中加入不同浓度Cs A对Cyp B表达的影响,结果显示,随着Cs A浓度的增加,Cyp B的表达量逐渐下降,该结果表明Cs A能够抑制Cyp B的表达。利用Real-time PCR检测加入不同浓度Cs A对病毒复制的影响,结果显示,在低剂量药物浓度范围内,Cs A不仅能够抑制Cyp B的表达,而且同时抑制ORFV在宿主细胞中的复制增殖。上述结果进一步证实Cyp B是ORFV侵染过程中的重要辅助因子,能够促进ORFV复制。然而,ORFV是如何利用Cyp B促进其复制增殖并完成侵染的过程尚不清楚。因此,本研究利用免疫共沉淀技术筛选与Cyp B互作的蛋白。免疫共沉淀产物的SDS-PAGE和Western-blot的分析结果显示,在大小约为25 k D处可见有明显的差异条带。切下该差异蛋白条带进行质谱鉴定分析,将获得的原始质谱数据使用Mascot软件中的串级质谱数据搜索功能(MS/MS Ions Search)进行搜索鉴定,初步筛选获得6个可能与Cyp B相互作用的病毒相关蛋白。上述研究结果将不仅为从病毒与宿主互作角度阐明ORFV的致病分子机制奠定基础,也为利用Cyp B途径阻断ORFV的感染提供有价值的资料。